【摘 要】
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羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的传染性很强的传染病,呈全球性分布,羔羊对本病较为敏感,常造成重大的经济损失。本试验应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增了ORF
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羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的传染性很强的传染病,呈全球性分布,羔羊对本病较为敏感,常造成重大的经济损失。本试验应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增了ORFV Shaanxi分离株的B2L基因,并对其进行了序列分析及原核表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并以该重组蛋白为包被抗原,通过优化各种条件,初步建立了检测其抗体水平间接ELISA方法。获得如下研究结果:1.扩增了ORFV Shaanxi分离株的B2L基因,目的基因片段长度为1137 bp,测序后,与GenBank中已收录的其他11株病毒毒株的B2L蛋白进行了序列分析,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性在95.9%~97.4%和97.8%~99%之间。将目的基因成功连接到原核表达载体pET-28a,构建了重组质粒pET-28a-B2L。在大肠埃希菌原核表达系统中对重组质粒pET-28a-B2L进行诱导表达,获得了42 kD的B2L重组蛋白。2.以纯化的B2L重组蛋白为包被抗原,通过优化各种条件,建立了检测ORFV抗体水平的间接ELISA方法。优化的各条件是:抗原包被量为600 ng,血清和酶标二抗的稀释浓度1∶200和1∶5000;含5%脱脂奶粉的PBST封闭时间是1.5 h;血清和酶标二抗孵育1 h和0.5 h;TMB显色10 min。该方法特异性强、敏感性和重复性良好。对344份临床血清样品进行了检测,阳性检出率为96.8%。
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新课程英语教学具有传统教学不可比拟的优越性，体现了“一切为了学生，为了一切学生，为了学生的一切”的人本主义。其除了强调对学生的基础知识和基本技能的培养外，还注重对学生的情感态度与审美价值观的培养，促进学生非智力因素的发展。在新课程的实施过程中我积累了宝贵的经验和教训，在此与广大同行共享。 1.深入学习课改精神，转变观念，加深理解。 早在课改开始之初，我校教师就积极投入到对课改精神的学习和研讨中
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