【摘 要】
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颗粒细胞是卵泡内的功能细胞之一,对调控卵泡发育及排卵具有重要作用,当颗粒细胞功能异常,会引起卵泡闭锁及排卵异常。作为Sirtuins家族的成员之一,Sirt2是一种重要的组蛋白去乙酰化酶,需依赖NAD+活性催化不同底物去乙酰化,参与调控微管动力学、染色体排列、能量代谢及氧化应激等多种生理过程。但Sirt2在绵羊卵巢颗粒细胞的细胞周期、增殖、凋亡、抗氧化及类固醇激素分泌功能中的作用与调控机制未见报道
【基金项目】
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河北省自然科学基金项目（C2019204260）； 河北省高等学校科学技术研究项目（ZD2020108）； 河北农业大学精准畜牧学科群建设项目（1090064-2）；
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颗粒细胞是卵泡内的功能细胞之一,对调控卵泡发育及排卵具有重要作用,当颗粒细胞功能异常,会引起卵泡闭锁及排卵异常。作为Sirtuins家族的成员之一,Sirt2是一种重要的组蛋白去乙酰化酶,需依赖NAD+活性催化不同底物去乙酰化,参与调控微管动力学、染色体排列、能量代谢及氧化应激等多种生理过程。但Sirt2在绵羊卵巢颗粒细胞的细胞周期、增殖、凋亡、抗氧化及类固醇激素分泌功能中的作用与调控机制未见报道。本研究以绵羊卵巢颗粒细胞为试验材料,通过转染si-Sirt2干扰颗粒细胞Sirt2表达。颗粒细胞与绵羊裸卵共培养,探究共培养体系下干扰颗粒细胞中Sirt2表达对卵母细胞成熟的影响。采用siRNA干扰、免疫荧光染色、MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法及ELISA等技术与方法探讨Sirt2在绵羊卵巢颗粒细胞的细胞周期、增殖、凋亡、抗氧化及类固醇激素分泌功能中的作用及相关调控机制。结果表明:（1）利用转染si-Sirt2可成功敲低绵羊卵巢颗粒细胞中Sirt2表达。绵羊卵巢颗粒细胞中,Sirt2在细胞质和细胞核中均有表达,但以细胞质表达为主;（2）当绵羊卵巢颗粒细胞与裸卵共培养时,干扰颗粒细胞Sirt2表达后共培养的裸卵成熟率为33.60%,与对照组47.98%的成熟率相比,显著降低（P<0.05）;（3）在干扰Sirt2表达对绵羊卵巢颗粒细胞周期影响方面,颗粒细胞转染24 h后,与对照组相比,G0/G1期细胞比例显著增加（P<0.05）,而S期和G2/M期细胞比例显著降低（P<0.05）;（4）在颗粒细胞增殖方面,颗粒细胞转染24 h、48 h和72 h后,与对照组相比,细胞增殖活力无显著性差异（P>0.05）;（5）在颗粒细胞凋亡方面,转染24 h后,与对照组相比,凋亡率显著升高（P<0.05）,且抑凋亡基因Bcl-2的表达量显著降低（P<0.05）,促凋亡基因Bax、Caspase-3的表达量显著升高（P<0.05）;（6）在颗粒细胞抗氧化功能方面,颗粒细胞转染24 h后,ROS水平显著提高（P<0.05）,且FoxO3a、SOD2、CAT和GPX4的基因表达显著降低（P<0.05）;（7）干扰绵羊卵巢颗粒细胞Sirt2表达后,可通过提高StAR、CYP11A1的基因表达,抑制CYP1 7A1、CYP19A1、3β-HSD和17β-HSD的基因表达促进P4的分泌（P<0.05）,对E2及T的分泌没有显著性影响（P>0.05）;并且,干扰Sirt2表达后能够激活ERK1/2信号通路,从而提高P4的分泌量。综上,干扰绵羊卵巢颗粒细胞Sirt2表达后,会阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、减弱细胞的抗氧化能力,诱导P4的合成及分泌从而抑制共培养体系下的卵母细胞成熟。并且,Sirt2可通过ERK1/2信号通路调控P4的分泌。
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