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鲢（Hypophthalmichthys molitrix）是我国主要的淡水养殖鱼类之一，其养殖模式和养殖技术已经完全成熟，但是鲢对低氧环境比较敏感且耐受程度低，易发生大面积的泛塘现象。本文以鲢为研究对象，开展了其细胞周期蛋白(Cyclin)相关基因(CyclinA、CyclinB、CyclinD和CyclinE)、细胞周期检测点激酶（Chk1）和细胞周期分裂素基因（Cdc25A）的克隆、组织表达以及低氧胁迫过程中这几个细胞周期相关基因在鲢脑、肝脏、鳃三个与呼吸相关的组织器官中的表达分析。同时我们通过流式细胞分析法以及TUNEL法检测低氧诱导下鲢肝、脑细胞凋亡情况。实验结果如下: 1.鲢细胞周期相关基因的克隆及低氧胁迫下的表达分析根据GenBank中斑马鱼的细胞周期相关基因序列对保守区引物进行设计，采用同源克隆和RACE技术获得了鲢CyclinA、CyclinB和CyclinE全长序列，并扩增CyclinD、Chk1和Cdc25A基因的核心片段。CyclinA基因全长1654bp，5非编码区73bp，3非编码区396bp，最大开放阅读框1185bp，编码394个氨基酸;CyclinB基因全长1523bp，5非编码区77bp，3端252bp，最大开放阅读框1194bp，编码397个氨基酸;CyclinE基因全长1881bp，5非编码区212bp，3非编码区430bp，最大开放阅读框1239bp，编码412个氨基酸。氨基酸序列同源一致性比对结果显示，鲢CyclinA和CyclinB基因与鲤鱼的这两个基因氨基酸序列同源一致性最高，分别是99％和100％，CyclinE基因与斑马鱼的CyclinE基因氨基酸序列同源一致性最高为99％。 半定量RT-PCR检测结果显示，CyclinA基因在肝和脑中表达量较高，在鳃中表达量较低;CyclinB基因在心脏中表达量较高，在其他的组织中表达量较低;CyclinD基因在肝、脑、肾和心脏中的表达量比较高，在其他组织中的表达比量较低;CyclinE基因在肌肉、脑和肝中表达量较高，在其他组织中表达量较低;Chk1基因在肝和脑中表达量较高，在脾中不表达，在其他组织中表达量较低;Cdc25A基因在心脏、脑、肝中表达量较高，在鳃中表达量较低，在其他组织中不表达。Real-time PCR检测结果显示，鲢由正常情况下低氧胁迫至浮头再到死亡的过程中，在肝脏中，CyclinA和CyclinE基因表达量逐渐下降(P＜0.05);CyclinB和CyclinD基因表达量无明显变化(P＞0.05);Chk1基因表达量先升高然后下降(P＜0.05); Cdc25A基因表达量先下降后升高（P＜0.05）。在脑中，CyclinA和Cdc25A基因表达量先下降然后上升(P＜0.05); CyclinB和CyclinD基因表达量无明显变化(P＞0.05);CyclinE基因表达量呈现下降趋势(P＜0.05); Chk1基因表达量先升高然后下降(P＜0.05);在鳃脏中，CyclinA和CyclinE基因表达量逐渐下降(P＜0.05); CyclinB和CyclinD基因表达量无明显变化（P＞0.05）;Chk1基因表达量先升高然后下降(P＜0.05); Cdc25A基因表达量先下降后升高(P＜0.05)。本研究中结果显示四个细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinE、细胞周期检测点激酶Chk1和细胞周期分裂素基因Cdc25A的表达受低氧应激的调节。 2.AnnexinV/PI流式细胞分析法和TUNEL法检测低氧诱导下鲢肝、脑细胞凋亡情况本实验通过Annexin V/PI流式细胞分析法和TUNEL法检测低氧胁迫下鲢肝、脑细胞的凋亡情况。Annexin V/PI流式细胞仪分析，在肝脏中细胞凋亡率依次是对照组8.85±0.24、浮头期22.06±0.57、死亡期22.91±0.49;在脑中细胞凋亡率依次是对照组8.18±0.45、浮头期24.80±0.63、死亡期24.86±0.21。TUNEL法检测显示，在肝脏中细胞凋亡率是对照组3.80±0.16、浮头期36.78±0.34、死亡期37.27±0.35;在脑中细胞凋亡率依次是对照组6.74±0.30、浮头期35.04±0,40、死亡期35.71±0.41。结果表明与正常对照组比较，低氧胁迫后鲢肝、脑细胞凋亡显著增加，但在死亡时期凋亡细胞数目却没有明显差异。