葎草内生真菌的分离鉴定及抗菌性初步研究

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葎草Humulus scandens (Lour.) Merr又名拉拉秧,为桑科植物。可全草入药,其干燥全草具有清热解毒、消淤肿、抗菌消炎等功效。许多学者从药用植物内生菌里陆续提取出许多结构新颖的化合物,而且大多具有独特的生物活性,对药物植物内生菌的研究已成为热点。基于此,本研究对葎草内生真菌进行了初步研究,主要结果如下:1分离通过匀浆法和组织切块法,采用马铃薯葡萄糖培养基,从葎草的根、茎、叶、叶柄等组织中共分离纯化得到21株内生真菌。采用对峙法测量抑菌活性,表明:其中对病原菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有拮抗活性的菌株有2株,分别为SL8和SS3。2鉴定经过对葎草内生真菌的菌落、菌丝和孢子等进行形态学鉴定,对真菌核糖体RNA的ITS序列分析进行分子生物学鉴定,确定SS3为半知菌亚门丛梗孢目镰孢霉属真菌。SL8经鉴定为木霉属,未知菌种。3优化以增强抑菌活性为目的,对SL8的发酵培养基成分进行优化试验发现:以马铃薯葡萄糖培养基为原始培养基,250mL锥形瓶装液量为80mL、葎草汁添加量为6%、接种量为4%、发酵时间为6d为比较适合的培养条件,此条件下SL8发酵液的抑菌活性最高,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别达到26mm和23mm。4活性物质的特性葎草内生真菌的发酵液在40~90℃范围内对金黄色葡萄球菌具有良好的抑制性;并且在pH4~8具有良好的抑菌效果。5活性物质的分离经活性物质的化学成分检识初步证实,SL8发酵液的活性物质主要为多糖类和内脂类物质。通过逐级萃取分析抑菌活性物质,SL8的抑菌物质主要集中在乙酸乙酯的萃取相中。经过柱层析及红外光谱分析证实活性物质中含有羰基和羟基等基团。初步判定活性物质为多糖类物质。经实验,葎草中存在大量内生菌,本研究从21株内生真菌中筛选出2株高效抗病菌株,分别属于镰刀菌属和木霉属,在适合的培养条件此条件下SL8的抑菌活性最高,抗菌物有很好的抗酸耐热和耐光照特性,为进一步的深入研究提供基础资料。
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