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本论文对蓝狐卵母细胞OPS法玻璃化冷冻保存、体外受精和胚胎移植进行了系统研究,目的是对经济动物保种技术进行新探索,同时为狐狸的扩繁、改良和新品种培育工作提供快速有效的技术方法。
在蓝狐卵母细胞OPS冷冻保存试验中,比较了不同玻璃化液(EFS30、EFS40、EDFS30、EDFS40)对卵母细胞的冷冻保存效果,以及不同培养时间(0、24、48、72h)的卵母细胞在玻璃化液EDFS30中平衡不同时间(15、25、35、60s)后的冷冻保存效果。结果表明,卵母细胞在玻璃化液EDFS30中的冷冻效果最好,解冻后形态正常率(91.66%)和成熟率(10.61%)与对照组无差异(P>0.05),其他玻璃化液所得结果与对照组间存在显著差异(P<0.05)。经培养72h的卵母细胞在预处理液10%E+10%D中平衡30s、玻璃化液EDFS30中平衡25s后冷冻保存效果最好,解冻后成熟率为10.61%,与对照组(14.52%)无显著差异(P>0.05),其它培养时间及冷冻平衡时间所得结果与对照组间存在显著差异(P<0.05)。
蓝狐卵母细胞在成熟液中分别培养0,24,48h后与获能精子共孵育24h,然后将卵子洗净继续培养24h后进行固定染色压片,对照组为相同培养液中培养48、72、96h后的卵母细胞固定染色压片,观察卵母细胞的成熟情况。结果表明,经48、72、96h培养后受精组中GV期卵母细胞所占比例(分别为21.19%,13.71%,10.62%)比对照组(51.30%,47.92%,44.18%)低(P<0.01),MⅡ期(包括原核)卵母细胞所占比例(11.86%,22.58%,18.58%)比对照组(7.83%,8.33%,10.78%)高(P<0.05),说明精子的穿入对卵母细胞的成熟有一定的促进作用。
在蓝狐繁殖季节末期(4月末~5月初)进行了胚胎移植试验,采用6只自然发情芬兰改良蓝狐为供体,第一次配种后第10~11天进行手术法冲取胚胎,共获得59枚胚胎。将37枚可用胚通过手术法移植到3只比供体自然发情晚1~2天、发情后第9天的芬兰改良蓝狐受体的子宫角内,其中2只受体狐分别在胚胎移植后第46天和第49天产下7只活仔狐(2只公狐、5只母狐)和1只母仔狐。