犬不比一般的畜禽,仅仅满足于人们物质生活的需要,它更为重要是满足人们精神生活的需要,其价值远远超过了一般的经济动物。目前犬常见病毒性传染病的发病率有上升趋势,对养犬业造成了巨大威胁。犬类行业的健康发展与犬病的有效控制成为国际社会关心的焦点问题。因而,研制快速、灵敏、准确诊断犬病的新方法,对于保证养犬业的可持续发展和确保人们的身心健康具有重要的现实意义。用诊断基因芯片可同步检测多种病原,能对混合感染迅速做出实验室诊断,具有所需样品量少、特异性强、快速、低廉等优点,在犬病的诊断、检疫等方面具有十分广阔的发展前景。本研究在获得犬腺病毒(Canine adenovirus,CAV)、犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬副流感病毒(Canine porainfluenca virus infections,CPIV)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)病原的基础上,选取各病毒基因保守序列,进行阳性克隆筛选,提取质粒模板,扩增纯化作为探针,应用微量点样技术将探针固定在硝酸素纤维膜上,80℃烤膜2h后,制备完成诊断基因芯片。然后提取样品中的核酸(RNA病毒核酸首先进行反转录)在PCR扩增中用生物素标记,并将所获得的扩增产物与诊断基因芯片进行特异性的逆向点杂交,最后通过芯片扫描来实现对犬多种病原的高效检测和分析判断。通过PCR或RT-PCR方法,分别扩增六种病原的保守核酸片断,用做对基因芯片进行质量控制,即对敏感性、特异性、重复性做了相应试验,通过试验确定了在42℃下最优的杂交条件及杂交环境。将RV细胞培养液作10倍倍比稀释后,进行灵敏度检测,可检测到的阳性杂交信号的最大稀释度为10-11,而凝胶电泳仅能检测到10-7,这说明芯片的灵敏度是PCR的104倍。用七种混合引物,空缺单个模板,经过生物素标记的(RT)PCR后分别与基因芯片进行杂交,试验结果表明:在相应杂交位点和阳性位点出现了特异性杂交点,而阴性对照和空白对照均未出现杂交信号,各位点重复性结果良好。通过试验对基因芯片制备的优化条件进行了探索,最终