论文部分内容阅读
本文共分为两部分，第一部分建立了转基因抗草甘膦RT73油菜的品系特异性检测方法。根据油菜基因组序列与外源基因序列连接区域设计特异性引物，进行PCR反应测试，并建立转基因抗草甘膦RT73油菜品系特异的定性PCR检测方法；将纯的转基因抗草甘膦油菜籽与非转基因油菜进行均质的质量配比，配成含量分别为10％、5％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％RT73油菜标准参照物质，分别提取DNA，并用以上所建立的方法进行灵敏度测试；采取同样的途径建立油菜内源特异基因HMG和FMV35S启动子的定性PCR检测方法，并进行灵敏度测试。最后在3’端边界序列建立了转基因抗草甘膦RT73油菜特异性定性PCR检测方法，该方法灵敏度能达到0.1％；并组织进行国际协同实验，对结果进行验证。第二部分建立了转基因抗草甘膦RT73油菜和抗草丁膦MS8×RF3杂交油菜定量检测方法。利用实时荧光定量PCR技术，对其内源基因和外源基因进行了定量检测，分别建立了外源基因和内标准HMG基因Ct值与模板量之间的标准曲线和线性回归方程，运用所建立起来的方法对进口油菜籽样品进行了定量分析。