【摘 要】
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目的研究去乙酰化酶SIRT1对帕金森模型小鼠的保护作用及其作用机制。方法1.在胶质细胞过表达SIRT1,研究SIRT1对胶质细胞炎症相关基因表达的影响。2.构建选择性过表达SIRT1的转基因小鼠,并对其进行帕金森造模,使用行为学及形态学的方法,研究SIRT1对于帕金森模型小鼠相关症状的影响。3.通过免疫共沉淀结合蛋白质谱（Co-IP/MS）的方法,寻找SIRT1的下游作用分子。4.构建下游分子过表
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目的研究去乙酰化酶SIRT1对帕金森模型小鼠的保护作用及其作用机制。方法1.在胶质细胞过表达SIRT1,研究SIRT1对胶质细胞炎症相关基因表达的影响。2.构建选择性过表达SIRT1的转基因小鼠,并对其进行帕金森造模,使用行为学及形态学的方法,研究SIRT1对于帕金森模型小鼠相关症状的影响。3.通过免疫共沉淀结合蛋白质谱（Co-IP/MS）的方法,寻找SIRT1的下游作用分子。4.构建下游分子过表达和敲降的细胞模型,研究下游分子对胶质细胞炎症相关基因表达的影响。5.通过蛋白纯化结合质谱的方法（Pull Down/MS）,研究SIRT1对下游分子的去乙酰化修饰位点。6.利用点突变技术对下游分子的去乙酰化位点进行突变,研究突变的下游分子在小胶质细胞中对炎症基因表达的影响。结果1.在原代小胶质细胞中过表达SIRT1可以有效抑制LPS诱导的促炎基因表达;在原代星形胶质细胞中过表达SIRT1则没有这种抑制作用。2.相比于野生型的帕金森模型小鼠,SIRT1转基因帕金森小鼠其小胶质和星形胶质细胞的激活明显受到抑制,多巴胺能神经元的数量有显著提高。3.通过Co-IP/MS联用的方法,鉴定出SIRT1作用的下游分子HSPA4。4.在原代小胶质细胞中过表达HSPA4可以有效抑制LPS诱导的促炎基因表达;在原代小胶质细胞中下调HSPA4的表达促进LPS诱导的促炎基因表达。5.通过Pull Down/MS发现HSPA4的三个乙酰化位点:K305,K351和K605。6.将HSPA4的三个乙酰化位点进行突变（赖氨酸突变为精氨酸）,发现突变的HSPA4没有抑制炎症基因表达的作用。结论体外模型中,SIRT1具有抑制原代小胶质细胞炎症基因表达的作用,而在星形胶质细胞没有这种作用。SIRT1转基因小鼠可以有效抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,降低神经炎症,从而保护多巴胺能神经元免受MPTP导致的伤害。通过Co-IP/MS联用方法,发现SIRT1作用的下游靶分子HSPA4。过表达HSPA4可以有效抑制原代小胶质细胞中炎症因子基因表达;相反,下调HSPA4表达则可进一步促进炎症因子的表达。通过突变HSPA4可能被SIRT1乙酰化的三个位点,在原代小胶质细胞当中过表达突变的HSPA4后其抑炎作用消失。
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