【摘 要】
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目的:本研究旨在通过对大鼠肾缺血再灌注损伤（Renal ischemic reperfusion injury,RIRI）模型的构建,探究低氧预适应（Hypoxic preconditioning,HPC）联合远隔缺血预适应（Remote ischemic preconditioning,RIPC）在大鼠RIRI过程中的作用及可能的机制。方法:（1）本研究选取40只雄性SD大鼠为研究对象。将其随机
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目的:本研究旨在通过对大鼠肾缺血再灌注损伤（Renal ischemic reperfusion injury,RIRI）模型的构建,探究低氧预适应（Hypoxic preconditioning,HPC）联合远隔缺血预适应（Remote ischemic preconditioning,RIPC）在大鼠RIRI过程中的作用及可能的机制。方法:（1）本研究选取40只雄性SD大鼠为研究对象。将其随机均分五个组别,分别如下:假手术处理组（Sham组）,缺血再灌注损伤模型组（I/R组）,I/R损伤模型前行低氧预适应干预组（HPC干预组）,I/R损伤模型前行远隔缺血预适应干预组（RIPC干预组）,以及I/R损伤模型前先行低氧预适应干预后再行远隔缺血预适应干预的联合干预组（HPC+RIPC干预组）。Sham组:切除右侧肾脏,显露出左侧的肾脏,仅对左肾动脉进行游离。I/R组:在显露左肾及完全游离出左侧肾动脉前,先切除大鼠右肾,左侧的肾动脉使用无创动脉夹进行了钳夹,时长45分钟,随后松开动脉夹制备I/R模型。HPC干预组:在I/R造模前,将实验大鼠置于恒温恒湿低氧舱内,正常光照,冲入氮氧混合气体,将氧浓度维持在12%,每日15小时（17:00至08:00）,持续4周,然后参考I/R组方法造模。RIPC干预组:在I/R造模前24小时,采用医用弹力绷带施加对大鼠左下肢圆形压缩的10分钟缺血和10分钟再灌注3个循环,随后建立缺血再灌注损伤模型,方法同I/R组。HPC+RIPC干预组:在I/R造模前24小时,对实验大鼠先参照HPC干预组方法进行低氧预适应,然后参照RIPC干预组方法行远隔缺血预适应,最后建立缺血再灌注损伤模型,方法同I/R组。以上各组大鼠在完成操作后按常规饲养24小时,麻醉后于下腔静脉内进行采血,打开大鼠胸腔,经左心室使用冰生理盐水反复灌洗肾脏,直到颜色变的苍白。取出左肾并在4%多聚甲醛48小时固定。（2）血生化检测血清尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）的水平。（3）肾脏病理检查行HE染色,观察各组大鼠肾脏病理损伤情况并进行Paller评分。（4）应用TUNEL法检测各组大鼠肾脏肾小管上皮细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）。（5）免疫化学方法检测各组大鼠肾组织Caspase-3以及Bcl-2蛋白表达水平。结果:（1）血生化检测结果:与Sham组比较,其余各组BUN和Scr水平均明显升高;与I/R组比较,HPC干预组、RIPC干预组以及HPC+RIPC干预组的Scr和BUN水平均明显下降;且与HPC干预组和RIPC干预组比较,HPC+RIPC干预组的Scr和BUN水平下降更明显。（2）肾组织HE染色病理检查结果:参照肾脏病理评分标准Paller评分进行评分。可清楚看到Sham组的肾小管上皮细胞排列整齐,肾小球结构基本正常,刷状缘完好,管腔中未发现坏死或者脱落的细胞或者管型形成;I/R组肾脏的组织结构明显杂乱,可见肾小管内部存在管腔扩张明显,上皮细胞内部出现程度不等的肿胀和空泡变化,管腔内部出现了坏死或者脱落的细胞甚至管型,部分刷状缘消失,肾脏间质出现充血以及浸润的炎症细胞,肾脏病理损伤严重;与I/R组比较,HPC干预组、RIPC干预组肾小管内部的管腔扩张程度减轻,上皮细胞坏死及管型情况减少,偶见间质内充血以及浸润的炎症细胞,肾脏病理损伤程度减轻;相比于HPC干预组和RIPC干预组,HPC+RIPC干预组肾脏的病理破坏程度明显减轻,仅表现轻度的肾小管管腔扩张,较少见脱落坏死的细胞。（3）TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡情况及凋亡指数（AI）:Sham组大鼠肾小管组织中极少见到凋亡的上皮细胞;I/R组肾小管的上皮细胞凋亡程度较为严重,荧光下可以看到较多的凋亡上皮细胞;HPC干预组和RIPC干预组均可减轻缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡,凋亡情况较I/R组减轻;与HPC干预组和RIPC干预组比较,HPC+RIPC干预组可见肾小管上皮细胞凋亡程度改善更明显。（4）免疫组化染色法观察分析Caspase-3和Bcl-2的蛋白表达:与sham组相比,I/R组的Caspase-3表达水平明显地提高,而Bcl-2蛋白表达则明显减少;与I/R组相比,HPC干预和RIPC干预组Bcl-2表达有所增加,而Caspase-3表达减少,统计学差异有意义;而与HPC干预组和RIPC干预组相比,HPC+RIPC干预组Bcl-2表达明显增加,Caspase-3表达明显减少。结论:低氧预适应与远隔缺血预适应均可减轻大鼠缺血再灌注肾损伤,且两者存在协同作用。其机制可能是通过提升Bcl-2蛋白的表达以及下降Caspase-3蛋白的表达,从而抑制组织内细胞凋亡的发生。
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