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目的： 研究临床分离的肺炎克雷伯菌对氯霉素类药物的的耐药性及氯霉素抗性基因floR）在肺炎克雷伯菌中的分布及其在基因组的定位，探讨floR基因相关可移动DNA元件的结构及其水平转移的分子机制，为有效防治耐药性的形成和播散提供实验依据。 方法: 1.以2010年～2014年间温州医科大学附属第一医院临床分离的肺炎克雷伯菌为研究样本，分析肺炎克雷伯菌对氯霉素类药物（氯霉素、氟苯尼考）的耐药情况。 2.floR基因阳性菌株的筛查:通过PCR的方法来检测327株肺炎克雷伯菌中floR基因的分布情况，PCR产物测序确定floR基因阳性菌株。 3.floR基因水平转移能力及其所在质粒的研究 (1)用肉汤法接合转移试验及克隆转化试验检测floR基因的水平转移能力，并对接合子和转化子进行验证，同时检测氯霉素类药物对接合子和转化子的MIC值。 (2)挑取其中一株接合转移成功的接合子，提取质粒进行高通量测序，定位floR基因，确定质粒的结构。 4.floR基因阳性菌株间的同源性分析:通过脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gelelectrophoresis，PFGE)方法分析floR基因阳性菌株间的同源性，通过S1-PFGE方法分析floR基因阳性菌株质粒的特性，研究floR基因阳性菌株的流行特征。 结果: 1.2010年～2014年温州医科大学附属第一医院临床标本中共分离到肺炎克雷伯菌327株，用琼脂稀释法检测肺炎克雷伯菌对氯霉素类药物的MIC值:对氯霉素的耐药率为34.6％;对氟苯尼考的耐药率为19.0％。 2.PCR及测序确认23株肺炎克雷伯菌携带floR基因，阳性率为7.03％(23/327)，对氯霉素类药物均表现出不同程度的耐药。 3.克隆转化试验成功获得23株floR基因阳性克隆菌株，其中22株克隆菌株对氯霉素类药物均表现为耐药性增高，只有一株克隆菌株表现为对氟苯尼考和氯霉素的敏感性升高;肉汤法接合转移试验成功获得3株oR基因阳性接合子，接合子对氯霉素类药物的耐药性增高。 4.floR基因所在质粒的研究:对其中一株接合转移阳性菌株的携带floR基因质粒进行测序分析，结果显示该质粒大小为137kb，其中floR基因的上下游序列均为转座酶基因。 5.脉冲场凝胶电泳分析发现23株floR基因阳性的肺炎克雷伯菌中，有22个PFGE型，有两株菌相似度＞80％，为同一个PFGE型。S1-PFGE结果发现，floR基因阳性的23株肺炎克雷伯菌的质粒图谱相差很大，接合转移成功的三株肺炎克雷伯菌，其中两株为同一个PFGE型，而这两株菌的接合子的S1-PFGE结果显示接合子质粒条带相似，但是定位floR基因是否位于这个质粒上还需要做进一步的Southern Blot来验证。 结论: 1.高通量测序技术能使我们在短时间内测定核酸序列，通过对质粒序列进行分析来探索基因序列结构与病原微生物耐药性的关系，对于致病菌中耐药基因的分布及新基因的发掘和功能研究起着极为有效的作用，为新药的研制开发提供了新的思路。 2.本地区临床分离的肺炎克雷伯菌中检测到floR基因，携带率为7.03％。 3.本研究中的floR基因定位于质粒上，质粒较大，携带有接合转移系统和多种耐药基因，结构比较复杂，可以通过接合转移试验进行水平转移，形成耐药性的播散。 4.本研究中23株floR基因阳性菌株中，有22个PFGE型，有两株菌相似度＞80％，为同一个PFGE型，其余菌株相似度较低，揭示floR基因阳性菌株遗传背景的多样性。