马立克氏病病毒(MDV)基因组庞大,并具有严格的细胞结合性,应用常规分子生物学技术对其研究费时费力,进展缓慢。而20世纪90年代新发展起来的一种大规模DNA片段克隆的载体系统——细菌人工染色体(BAC),使得对MDV的研究变得简便高效。将MDV全基因组克隆至BAC载体,构建的MDV感染性BAC克隆可以质粒形式在大肠杆菌中保存、复制,并能利用大肠杆菌中成熟的DNA修饰技术,快速地实施基因删除、插入、替换或点突变等各种修饰；而且MDV感染性BAC克隆并未丧失感染性,将其转染真核细胞,能拯救出MDV。MDV1型CVI988株弱毒疫苗是目前预防MD效果最好,应用广泛的疫苗。将其作为鸡用疫苗活载体具有独特的优势：基因组大,已确定多处非必需区,允许插入较大的外源基因；作为细胞结合毒,受母源抗体干扰小,可以早期免疫；在表达插入的外源基因同时,对MD的免疫效果和CVI988疫苗相同。禽流感、传染性法氏囊病都是危害养鸡业的重大疾病。血凝素(HA)是禽流感病毒(AIV)的最主要保护性抗原；衣壳蛋白VP2是传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要结构蛋白,它们都能诱导中和抗体产生。将HA、VP2基因分别插入CVI988BAC,构建HA-CVI988BAC和VP2-CVI988BAC,转染真核细胞所获得的重组病毒可能是一株具有良好安全性的候选疫苗株。将AIV H9N2亚型HA基因和IBDV VP2基因参考鸡的密码子优化合成后,克隆至真核表达载体pEP-BGH-end,成功构建了重组质粒pBGH-HA和pBGH-VP2。E.coliGS1783菌株的基因组整合了Red两步重组系统的基因,能在不同的诱导条件下表达不同重组阶段所需的酶。为了进行后续的Red两步重组,将CVI988BAC从E.coli DH10B中提取出来,电转化E.coli GS1783菌株,电转后通过酶切图谱分析筛选出阳性克隆,将其转染鸡胚成纤维细胞,拯救出了CVI988病毒,说明CVI988BAC已经成功转化E.coli GS1783.本研究构建了重组质粒pBGH-HA和pBGH-VP2,获得了CVI988BAC/GS1783菌株,为后续将HA、VP2基因插入CVI988BAC,构建HA-CVI988BAC和VP2-CVI988BAC做好了准备。