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藏药绿萝花作为西藏自治区特有的珍贵药材,因其有良好的药理活性,被广泛用于预防和治疗多种疾病。银锻苷是绿萝花中含量最高的黄酮类成分,能够抑制胃肠道中碳水化合物的消化和葡萄糖的摄取,还能有效降低链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血糖浓度。此外,银锻苷具有较好的抗氧化活性,抗骨质舒松作用。然而,因缺乏关于绿萝花及银锻苷的肠吸收研究,限制了其药理活性的发挥。口服是药物最常见的给药形式,小肠的吸收是药物进入体内产生药理活性的先决条件。通过研究银锻苷在肠道的吸收特征、吸收部位和影响因素,为银锻苷的综合利用提供依据。
本文采用三种体外肠吸收模型进行评价,确定了最适用于研究绿萝花水提取物的体外肠吸收模型。利用Ussing chamber技术研究绿萝花中主要活性成分银锻苷在不同肠段的吸收情况,系统地考察ATP结合转运体(ABC)转运蛋白对其吸收的影响。实验结果证明,溶解性差和外排蛋白参与吸收是影响其吸收的主要因素。基于此结论,通过制备以银锻苷磷脂复合物为载体的亚微乳,为提高银锻苷的生物利用度提供一种新的思路。总体上,本文的研究内容主要包括以下4个方面:
①以绿萝花水提物为研究对象,利用LC-MS/MS鉴定出水提物中的12种成分。利用三种体外肠吸收模型(外翻肠囊模型、Ussing chamber技术和Caco-2细胞模型)与动物口服吸收模型来研究水提物中12种成分的吸收情况。在口服吸收模型中,发现有11种成分被检测到存在吸收。仔细评估三种体外肠吸收模型和动物口服吸收模型,表明利用Ussing chamber技术的研究结果与动物口服吸收模型的研究结果具有高度相关性。因此,确定了Ussing chamber技术为研究绿萝花水提物体外吸收的最佳手段。
②以绿萝花中主要活性成分银锻苷为研究对象,采用Ussing chamber技术,探讨可能影响银锻苷生物利用度的因素,系统地研究银锻苷在不同肠段中的吸收情况,并考察三种ABC转运蛋白对其吸收的影响。以表观渗透系数(Papp)为指标,研究发现银锻苷在回肠的Papp明显高于空肠及十二指肠,表明回肠是银锻苷的最佳吸收部位。根据三种ABC转运蛋白对银锻苷吸收的影响,发现银锻苷可能是多药耐药相关蛋白(MPR2)的底物,而不是P-糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的底物。同时也考察三种ABC转运蛋白对绿萝花水提物吸收的影响,在加入MRP2蛋白抑制剂后,银锻苷、helichrysoside和紫云英苷在绿萝花水提物中的吸收也明显增加,推测这三种成分的吸收可能受到MRP2蛋白的影响。
③为改善银锻苷的溶解性,采用溶剂挥发法,制备银锻苷磷脂复合物,以复合率作为评价指标,以单因素和正交实验优化银锻苷磷脂复合物的制备工艺,获得最佳工艺条件并制备成稳定的复合物,其溶解度和油水分配系数显著提高。FT-IR、DSC和XRD的表征结果表明,银锻苷磷脂复合物中没有新物质的生成,但具有完全不同于物理混合样品的特征,银锻苷与磷脂之间可能以氢键或范德华力形成稳定的复合结构,银锻苷以无定型的状态高度分散在磷脂中。
④以银锻苷磷脂复合物作为中间体制备银锻苷亚微乳,并用单因素和正交实验考察处方工艺,获得最佳处方工艺条件。所制备的银锻苷亚微乳外观为白色均匀乳液并具有良好的稳定性。运用Ussing chamber技术在体外考察银锻苷亚微乳在SD大鼠不同肠段的吸收情况,结果表明银锻苷亚微乳可明显改善银锻苷在大鼠不同肠段的吸收。
本文采用三种体外肠吸收模型进行评价,确定了最适用于研究绿萝花水提取物的体外肠吸收模型。利用Ussing chamber技术研究绿萝花中主要活性成分银锻苷在不同肠段的吸收情况,系统地考察ATP结合转运体(ABC)转运蛋白对其吸收的影响。实验结果证明,溶解性差和外排蛋白参与吸收是影响其吸收的主要因素。基于此结论,通过制备以银锻苷磷脂复合物为载体的亚微乳,为提高银锻苷的生物利用度提供一种新的思路。总体上,本文的研究内容主要包括以下4个方面:
①以绿萝花水提物为研究对象,利用LC-MS/MS鉴定出水提物中的12种成分。利用三种体外肠吸收模型(外翻肠囊模型、Ussing chamber技术和Caco-2细胞模型)与动物口服吸收模型来研究水提物中12种成分的吸收情况。在口服吸收模型中,发现有11种成分被检测到存在吸收。仔细评估三种体外肠吸收模型和动物口服吸收模型,表明利用Ussing chamber技术的研究结果与动物口服吸收模型的研究结果具有高度相关性。因此,确定了Ussing chamber技术为研究绿萝花水提物体外吸收的最佳手段。
②以绿萝花中主要活性成分银锻苷为研究对象,采用Ussing chamber技术,探讨可能影响银锻苷生物利用度的因素,系统地研究银锻苷在不同肠段中的吸收情况,并考察三种ABC转运蛋白对其吸收的影响。以表观渗透系数(Papp)为指标,研究发现银锻苷在回肠的Papp明显高于空肠及十二指肠,表明回肠是银锻苷的最佳吸收部位。根据三种ABC转运蛋白对银锻苷吸收的影响,发现银锻苷可能是多药耐药相关蛋白(MPR2)的底物,而不是P-糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的底物。同时也考察三种ABC转运蛋白对绿萝花水提物吸收的影响,在加入MRP2蛋白抑制剂后,银锻苷、helichrysoside和紫云英苷在绿萝花水提物中的吸收也明显增加,推测这三种成分的吸收可能受到MRP2蛋白的影响。
③为改善银锻苷的溶解性,采用溶剂挥发法,制备银锻苷磷脂复合物,以复合率作为评价指标,以单因素和正交实验优化银锻苷磷脂复合物的制备工艺,获得最佳工艺条件并制备成稳定的复合物,其溶解度和油水分配系数显著提高。FT-IR、DSC和XRD的表征结果表明,银锻苷磷脂复合物中没有新物质的生成,但具有完全不同于物理混合样品的特征,银锻苷与磷脂之间可能以氢键或范德华力形成稳定的复合结构,银锻苷以无定型的状态高度分散在磷脂中。
④以银锻苷磷脂复合物作为中间体制备银锻苷亚微乳,并用单因素和正交实验考察处方工艺,获得最佳处方工艺条件。所制备的银锻苷亚微乳外观为白色均匀乳液并具有良好的稳定性。运用Ussing chamber技术在体外考察银锻苷亚微乳在SD大鼠不同肠段的吸收情况,结果表明银锻苷亚微乳可明显改善银锻苷在大鼠不同肠段的吸收。