MiR-133b对帕金森病多巴胺能神经元模型轴突变性的影响

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目的:探讨mi R-133b对l-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型中多巴胺能神经元数量、轴突长度、Rho A、TH表达量的影响。方法:原代陪养大鼠胚胎中脑细胞,使用1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导损伤,建立帕金森病多巴胺能神经元模型。实验分为(1)空白对照组(control):无任何干预措施;(2)阴性对照组(mi R-NC):LV-mi R-NC转染细胞48 h,无血清培养基换液后继续培养24 h;(3)mi R-NC+MPP+组:LV-mi R-NC转染细胞48 h,含10μmol?L-1 MPP+的无血清培养液损伤24 h;(4)mi R-133b+MPP+组:LV-mi R-133b转染细胞48 h,含10μmol?L-1 MPP+的无血清培养液损伤24 h。通过荧光定量PCR技术检测mi R-133b在各组的表达水平。应用免疫荧光染色法对DAG神经元进行形态学观察,同时检测DAG神经元数量、轴突长度变化。采用免疫印迹法检测大鼠胚胎中脑细胞中RHOA及TH蛋白表达水平变化。结果:MPP+诱导损伤后DAG神经元后细胞数量减少,并且多数神经元胞体存在,但轴突长度明显缩短,轴突呈串珠样肿胀或断裂。与空白对照组比较,mi R-NC+MPP+组mi R-133b含量明显降低,DAG阳性细胞数及轴突长度均显著减少,Rho A表达量增加,TH表达量降低,差异有统计学意义;与mi R-NC+MPP+组比较,mi R-133b+MPP+组mi R-133b含量明显升高,DAG阳性细胞数及轴突长度均增加,Rho A表达量下降,TH表达量增加,差异有统计学意义。结论:实验结果表明,MPP+可诱导多巴胺能神经元死亡和轴突的退行性变,并且抑制mi R-133b表达。过表达mir-133b可通过抑制靶蛋白Rho A显著减轻DAG神经元及轴突长度损伤,发挥一定的神经元保护作用。
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