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目的采用组织特异性启动子SM22α和KDR,结合RNA干扰原理,构建靶向大鼠Pik3cb基因的真核表达载体,通过Pluronic F-127缓释系统转染大鼠颈静脉移植血管,研究其对VSMC、VEC及静脉移植血管新生内膜增生的影响,探索有效防治静脉移植血管狭窄的新方法,并为预防血栓形成提供理论依据。方法根据Genbank数据库提供的大鼠PI3K p110β亚单位编码基因Pik3cb mRNA序列(NM: 053481),按照shRNA设计原则,分别构建合成含有SM22αp/e、KDR p/e和CMV pGenesil-1的质粒表达载体,并命名为SM22α-Pik3cb-shRNA、KDR-Pik3cb-shRNA和CMV-Pik3cb-shRNA。建立大鼠颈静脉-动脉移植模型,通过Pluronic F-127质粒缓释系统在血管吻合完成后进行局部RNA干扰。实验分6组,每组30只SD大鼠。A组:对照组(25% Pluronic F-127组);B组:KDR-Pik3cb-shRNA组;C组:SM22α-Pik3cb-shRNA组;D组:CMV-Pik3cb-shRNA组;E组:KDR-Pik3cb-shRNA+SM22α-Pik3cb-shRNA混合组;F组:阳性对照组(wortmannin组)。根据实验分组的不同,将含有50μg shRNA质粒,或50μg wortmannin的凝胶,或单纯200μL 25% Pluronic F-127凝胶均匀涂抹在移植静脉周围,分别于术后1 d、3 d、7 d、14 d和28 d截取移植血管。HE染色观察新生内膜厚度;免疫组化检测磷酸化mTOR(Ser2448);TUNEL法测细胞凋亡。另设一组,于术后3 d取材,荧光定量PCR测定Pik3cb mRNA的相对表达量。结果成功构建大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型,大体观察移植血管通畅率, KDR-Pik3cb-shRNA组通畅率最低(23.3%),与对照组相比有统计学意义(x2= 4.593,P < 0.05);SM22α-Pik3cb-shRNA组通畅率最高(86.7%),与对照组相比有统计学意义(x2 = 9.32,P < 0.01)。术后3 d,荧光定量PCR检测Pik3cb mRNA相对表达量,阳性对照组和质粒转染组较对照组明显下降,有统计学意义(F = 386.3,P < 0.01)。B组、C组、D组、E组和F组较对照组分别下降了46.8%、73.3%、81.2%、64.2%和68.4%。术后1～3 d各组新生内膜厚度差别无统计学意义;术后7 d各组新生内膜比较有统计学意义(F = 82.59 ,P < 0.01),术后14 d各组新生内膜比较有统计学意义(F = 325.09,P < 0.01),术后28 d各组新生内膜比较有统计学意义(F = 483.76,P < 0.01);术后28 d时,对照组新生内膜较术后1 d增厚10.4倍;B组、C组、D组、E组和F组分别增厚11.6倍、6.0倍、7.1倍、6.8倍和6.5倍。阳性对照组和质粒转染组移植静脉磷酸化mTOR(Ser2448)表达阳性面积均明显低于正常对照组,有统计学意义(F=50.41,P < 0.05); 28 d时,B组、C组、D组、E组和F组阳性面积百分比分别为0.93%、0.69%、0.49%、0.47%和0.43%,而对照组阳性百分比为1.48%。各组术后不同时间点移植静脉组织凋亡细胞阳性面积均明显高于正常对照组,有统计学意义(F=134.38,P < 0.05);14 d时各组凋亡细胞阳性面积达高峰,对照组1.27%,B组、C组、D组、E组和F组分别为1.95%、2.43%、3.18%、3.06%和2.94%。结论大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型是一种研究血管旁路移植术后桥血管狭窄的理想模型;SM22α-Pik3cb-shRNA可抑制血管新生内膜增生,其作机制可能是下调血管平滑肌细胞PI3K-Akt-mTOR信号通路而抑制血管平滑肌细胞增值并促进其凋亡;KDR-Pik3cb-shRNA可导致移植血管血栓形成,增加移植血管新生内膜厚度,其作用机制可能是下调血管内皮细胞PI3K-Akt-mTOR信号通路而妨碍移植血管的内皮化。