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大多数的体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization,IVF)方案常规采用控制性超排卵(?)(controlled ovarian hyperstimulation, COH),COH技术通常可得到10-14个成熟卵母细胞,但约有15-20%卵母细胞未达到成熟状态,这部分未成熟卵在卵胞浆内单精子显微注射(instracytoplasmis sperm injection,ICSI)中去颗粒细胞后常被丢弃,有研究显示裸卵和带颗粒细胞的卵在体外培养均可获得成熟卵母细胞,在此后的培养中其受精率、卵裂率及胚胎的各项指标皆相似,证实了未成熟裸卵母细胞可以进行体外成熟培养。因此充分利用ICSI脱颗粒细胞后的这部分未成熟卵母细胞,使之培养成熟,将会增加ICSI周期的胚胎数量,患者的助孕成功率也能得到一定的提高；虽然近10多年来,IVM(in vitro maturation, IVM)技术的应用得到了迅速的拓展,但该技术目前还处于探索阶段,仍然存在成熟率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率较低和种植率低等问题。解决这些问题关键在于IVM培养液的成分。尽管国际上已有公司研发了人未成熟卵母细胞体外成熟的培养液系统,但所用的培养液可能还缺少卵子成熟所必须的某些物质,仍摆脱不了成功率低、不稳定等缺陷,本课题就此展开研究,旨在建立一套有效的人卵母细胞体外成熟培养系统,对开发新的IVM培养系统,改善IVM的临床结局有重要意义。目的本课题对IVF患者COH后的未成熟卵母细胞进行研究,探讨商品化的IVM培养液中添加不同成分对未成熟卵母细胞的体外成热、受精和胚胎发育的影响,旨在建立一种有效的人卵母细胞体外成熟培养方案。方法本实验共选择216名ICSI患者,平均年龄35.9±5.4,216个ICSI周期,共收集265枚未成熟卵母细胞,未成熟卵母细胞中155枚为MI期,另110枚为GV期。患者来源于2011年3-11月期间到郑州大学第三附属医院接受ICSI的助孕患者,助孕指征均为男方因素而行ICSI的不孕患者。配制IVM培养液：A组：商品化的IVM培养液,未添加任何成分；B组(激素组)：添加含0.075IU/mL FSH及0.075IU/mL LH的HMG至基础IVM培养液中；C组(成熟卵泡液组)：50%基础IVM培养液与50%人成熟卵泡液配成。在进行ICSI操作过程中,把脱颗粒细胞后观察到的未成熟卵母细胞,置于事先配制好的IVM液中。分别观察各组24h和48h成熟情况,成熟后进行ICSI操作,并对此后形成的胚胎进行评分,最后进行统计分析。本课题的开展已获郑州大学第三附属医院伦理委员会的批准。每位患者均被事先告知并签署知情同意书,然后进入本研究。所有数据采用SPSS16.0统计软件包处理。计数资料采用χ2检验,Fischer的精确检验。检验水准为a=0.05。结果1一般情况共采集到未成熟卵母细胞265枚。未成熟卵母细胞中155枚为MI期,另110枚为GV期,进行体外培养后,24h后成熟的卵母细胞共126枚成熟率为47.5%,48h后成熟的卵母细胞共165枚成熟率为62.3%,成熟的卵母细胞均行ICSI授精。2比较三组培养液对未成熟卵母细胞体外成熟影响三组培养液培养未成熟卵母细胞,24h的成熟率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。C组48h成熟率(74.7%)比A组(53.4%)明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),C组48成熟率(74.7%)比B组(57.3%)明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。A组与B组未成熟卵母细胞48h成熟率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三组培养液对MI期卵母细胞进行体外培养后24h成熟率两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。体外培养后48h,C组成熟率(81.7%)高于B组(62.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。三组培养液对GV期卵母细胞进行体外培养后24h成熟率两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。体外培养后48h,C组成熟率(62.9%)高于A组(36.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。3不同时期未成熟卵母细胞的体外培养成熟的情况MI期卵母细胞体外培养后24h成熟率、48h成熟率(59.3%,77.4%)与GV期(30.9%,50.0%)比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。4IVM中应用三组不同培养液对受精、卵裂和可利用胚胎形成的影响C组未成熟卵母细胞体外培养后卵裂率、可利用胚胎率(91.3%,66.7%)较B组(71.0%,40.9%)高,差异有统计学意义(P<0.05)；C组未成熟卵母细胞体外培养后卵裂率、可利用胚胎率(91.3%,66.7%)较A组(67.6%,36.0%)高,差异有统计学意义(P<0.05)；B组未成熟卵母细胞体外培养后卵裂率、可利用胚胎率(71.0%,40.9%)较A组(67.6%,36.0%)高,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1添加卵泡液行体外成熟培养,可以提高未成熟卵母细胞的成熟率和发育潜能。2添加HMG比单纯的商品化IVM培养液培养效果要好。3MI期卵母细胞比GV期卵母细胞体外培养成熟率高。