【摘 要】
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目的:观察小鼠短暂局灶性脑缺血时TIGAR对于星形胶质细胞的保护作用。研究在缺血再灌损伤后的星形胶质细胞内TIGAR与NF-κB的作用机制以及其对炎症反应的影响。方法:采用小鼠
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目的:观察小鼠短暂局灶性脑缺血时TIGAR对于星形胶质细胞的保护作用。研究在缺血再灌损伤后的星形胶质细胞内TIGAR与NF-κB的作用机制以及其对炎症反应的影响。方法:采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transient middle cerebral occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型和体外培养的原代星形胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。在小鼠缺血侧脑组织中使用免疫荧光法,在培养的星胶细胞OGD/R模型中用Western blot检测缺血再灌后星形胶质细胞内TIGAR蛋白含量的变化。用构建的过表达TIGAR和沉默TIGAR的腺病毒感染原代星形胶质细胞,使用CCK-8和LDH试剂盒检测TIGAR对OGD再灌损伤的星形胶质细胞的保护作用。运用NADPH/NADP+和GSH/GSSG试剂盒检测过表达或沉默TIGAR后的缺血再灌后脑皮层和OGD/R处理后的星形胶质细胞内NADPH和GSH水平变化,用DHE染色法检测星形胶质细胞内的ROS变化。同时用Western blot和elisa检测OGD/R 24h后星形胶质细胞内IL-1β,TNF-α以及iNOS和COX-2的含量变化,在缺血再灌脑组织中使用免疫荧光法,对GFAP与IL-1β和COX-2进行共定位。在培养的星形胶质细胞内,过表达或沉默TIGAR后,用Western blot检测缺血再灌后,IκBα和p-IκBα变化的差异性,用核质分离和Western blot检测细胞核内NF-κB水平的变化。结果:脑缺血再灌后TIGAR在星形胶质细胞内的表达增加。用构建的过表达或干扰TIGAR的腺病毒侵染原代星形胶质细胞能有效地增加或降低TIGAR的表达。在星形胶质细胞OGD/R模型中,过表达TIAGR能显著地减少OGD/R诱导的星形胶质细胞的死亡;干扰TIGAR加重OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤。在缺血再灌的体内外模型中,过表达TIGAR显著地抑制OGD/R诱导的细胞内NADPH,GSH水平的降低以及ROS水平的增强;干扰TIGAR则促进细胞内NADPH,GSH水平的降低以及ROS水平的增强。在动物及细胞模型中,过表达TIGAR降低缺血再灌诱导的IL-1β,TNF-α以及iNOS和COX-2的水平;干扰TIGAR增强其诱导的IL-1β,TNF-α以及iNOS和COX-2的水平。在原代星形胶质细胞OGD再灌注的早期,过表达TIGAR降低OGD/R诱导的p-IκB的活化和NF-κB的入核;干扰TIGAR增强OGD/R诱导的p-IκB的活化。结论:小鼠脑缺血再灌注后TIGAR对星形胶质细胞发挥保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化剂NADPH抑制ROS,抑制NF-κB通路的激活,减轻炎症反应有关。
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