论文部分内容阅读
摘 要：文章首先对头孢呋辛钠无菌检查中应用到的仪器与材料进行介绍，从材料类型与仪器规格两方面展开。其次重点介绍检查任务开展的方法，论述方法学验证原理，并对整体检查过程的有效性进行讨论。促进注射用头孢呋辛钠生产质量提升。
关键词：头孢呋辛钠；无菌检查；方法学验证
一、仪器与材料
头孢呋辛钠属β-内酰胺类抗生素中的头孢菌素类，对革兰阳性球菌和部分革兰阴性杆菌均敏感。可用于敏感菌所致的呼吸道感染、耳、鼻、喉科感染、泌尿道感染、皮肤和软组织感染、骨和关节感染、产科和妇科感染、淋病等。根据《中国药典》的要求，当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。现将注射用头孢呋辛钠的无菌检查方法建立报道如下。
无菌检验前要将所用的仪器设备进行清洗消毒，避免在任务开展期间受到其他物质的污染，包括集菌仪与培养器。选择正规厂家生产的仪器设备，并对仪器设备的使用安全性进行检验，如果发现损坏或者规格不合理现象，要及时采取解决措施，制定检验环节的管理方案。头孢呋辛钠在检验环节需要添加一些单胞菌，这样能够更准确的判断材料中是否存在干扰物质，试验结果的准确度也有明显提升。仪器更新速度比较快，在选择期间要考虑检验任务需求，所选择的材料数量也要达到标准。HTY-2000A集菌仪、KDGB220和KDGB330集菌培养器，杭州高得医疗器械有限公司生产。验证试验用菌种包括金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、生孢梭菌[CMCC（B）64941]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉菌[CMCC（F）98003]，均来自中国医学细菌保藏中心，均为第3代。硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，均为北京三药科技开发公司生产。头孢菌素酶冻干粉（500万U/支）杭州北望生物技术有限公司生产。注射用头孢呋辛为国内药厂生产，规格为0.75g。
二、实验方法
1、菌液制备
准备菌液时要通过试验途径来进行，判断不同菌液中存在的成分是否能够满足使用需求标准，随着工作任务不断的深入进行，对菌液使用量也有大致的了解。在此阶段如果发现数量不足的现象，要及时对菌液进行补充。这样才能够避免检查任务中断。要确保菌液的新鲜程度，培养到使用的时间不可以超过24小时，保存的温度也是要特别控制的，维持在30摄氏度至35摄氏度之间，提取出检验环节需要的用量，进行对比分析，发现问题后采取有效的解决方案，要避免菌液中掺杂其他物质。分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，分别取上述培养物1mL，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释成50～100cfu/mL的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7d，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液5mL洗脱孢子，将孢子液移至比浊管中，于细菌标准比浊管进行比较，取1mL孢子原液用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释成含孢子数50～100cfu/mL的孢子悬液。
2、方法验证
用于实验方向的试验要分装6瓶，使用期间发现问题要及时与工作人员沟通。对于试液的PH值也要进行特别控制，检测环节要控制在PH7.0，这样的环境更有利于菌液存活，方便对其中的成本进行检验分析。每次添加的菌液量要符合实际需求，这样才能够更有效的验证，并且不会出现原液浪费的现象，通过加强检验环节的调节控制，能够更快速的完成无菌检查任务，6组试剂中要有对照组，将所得到的检验结果与对照组进行比较，判断参数结果的准确度。取供试品6瓶用0.9%无菌氯化钠溶液90mL溶解，混匀，于集菌仪上通过一副KDGB220集菌培养器中的一联滤筒中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次100mL，在最后一次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤，然后泵入100mL培养基，并加入约500万U的头孢菌素酶。在另一滤筒中泵入100mL培养基，并加入等量的试验菌，作为阳性对照。每种试验菌及相应的培养基同法逐一处理。另取一副KDGB220集菌培养器，分别泵入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基至两个滤筒中，作为阴性对照。上述集菌培养器分别置规定温度培养3～5d。
3、供试品测定
试验结束后要对器皿中的菌液进行清理，并采取有效的方法来判断最终结果是否与规定标准一致。在制药环节中无菌检查是保障药品质量的有效措施，通过加强各个环节的监管体系落实能够更好的提升产品质量，帮助技术人员判断生产环节中存在的问题，加快检查任务完成的速率。取供试品9瓶，用0.9%无菌氯化钠溶液140mL溶解，混匀，于集菌仪上通过一副KDGB330集菌培养器中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次300mL，共5次，在其中两管泵入各100mL硫乙醇酸盐流体培养基（其中一管接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌作为阳性对照），另一管泵入100mL的改良马丁培养基，并在每管中加入约500万U的头孢菌素酶。另取一副KDGB220集菌培养器，取上述溶剂和冲洗液同法操作，分并别泵入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，作为阴性对照。将集菌培養器分别按规定温度培养14d，逐日观察并记录，结果供试品管和阴性对照管均澄清，阳性对照管在48h内菌生长良好，本实验结果成立。
三、讨论
头孢呋辛钠为头孢菌素类广谱抗生素，对敏感菌有较强的抗菌活性，故在该品种的无菌检查时，应采取适当的方法消除和破坏其抗菌活性。作者在摸索该品种薄膜过滤法实验条件时，在相同样品量的情况下，曾采取仅用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗的方式，供试品试验管在规定时间内有试验菌生长微弱、缓慢或不生长的情况。而采取用含适量头孢菌素酶的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗的方式，也存在某些供试品试验管的试验菌在规定时间内生长微弱、缓慢的情况，说明这两种方法均不能有效消除头孢呋辛钠的抗菌活性。只有采取本文中将适量头孢菌素酶加入培养基的方法，使酶与药品能充分地接触，酶解作用完全，得以有效地灭活滤器中残留头孢呋辛钠的抗菌活性，而且所需冲洗液的量和冲洗次数也较合适，从而确认头孢呋辛钠在本文试验条件下方法的可靠性，可以保证检验结果的准确可靠。
参考文献：
[1] 闵红，裴小龙，杨晓莉.3种规格注射用头孢地嗪钠无菌方法学验证[J].安徽医药，2013（05）.
[2] 柏大为，钱桂英.注射用头孢匹胺钠的无菌检查方法学研究[J].今日药学，2012（11）.
关键词：头孢呋辛钠；无菌检查；方法学验证
一、仪器与材料
头孢呋辛钠属β-内酰胺类抗生素中的头孢菌素类，对革兰阳性球菌和部分革兰阴性杆菌均敏感。可用于敏感菌所致的呼吸道感染、耳、鼻、喉科感染、泌尿道感染、皮肤和软组织感染、骨和关节感染、产科和妇科感染、淋病等。根据《中国药典》的要求，当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。现将注射用头孢呋辛钠的无菌检查方法建立报道如下。
无菌检验前要将所用的仪器设备进行清洗消毒，避免在任务开展期间受到其他物质的污染，包括集菌仪与培养器。选择正规厂家生产的仪器设备，并对仪器设备的使用安全性进行检验，如果发现损坏或者规格不合理现象，要及时采取解决措施，制定检验环节的管理方案。头孢呋辛钠在检验环节需要添加一些单胞菌，这样能够更准确的判断材料中是否存在干扰物质，试验结果的准确度也有明显提升。仪器更新速度比较快，在选择期间要考虑检验任务需求，所选择的材料数量也要达到标准。HTY-2000A集菌仪、KDGB220和KDGB330集菌培养器，杭州高得医疗器械有限公司生产。验证试验用菌种包括金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、生孢梭菌[CMCC（B）64941]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉菌[CMCC（F）98003]，均来自中国医学细菌保藏中心，均为第3代。硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，均为北京三药科技开发公司生产。头孢菌素酶冻干粉（500万U/支）杭州北望生物技术有限公司生产。注射用头孢呋辛为国内药厂生产，规格为0.75g。
二、实验方法
1、菌液制备
准备菌液时要通过试验途径来进行，判断不同菌液中存在的成分是否能够满足使用需求标准，随着工作任务不断的深入进行，对菌液使用量也有大致的了解。在此阶段如果发现数量不足的现象，要及时对菌液进行补充。这样才能够避免检查任务中断。要确保菌液的新鲜程度，培养到使用的时间不可以超过24小时，保存的温度也是要特别控制的，维持在30摄氏度至35摄氏度之间，提取出检验环节需要的用量，进行对比分析，发现问题后采取有效的解决方案，要避免菌液中掺杂其他物质。分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，分别取上述培养物1mL，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释成50～100cfu/mL的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7d，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液5mL洗脱孢子，将孢子液移至比浊管中，于细菌标准比浊管进行比较，取1mL孢子原液用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释成含孢子数50～100cfu/mL的孢子悬液。
2、方法验证
用于实验方向的试验要分装6瓶，使用期间发现问题要及时与工作人员沟通。对于试液的PH值也要进行特别控制，检测环节要控制在PH7.0，这样的环境更有利于菌液存活，方便对其中的成本进行检验分析。每次添加的菌液量要符合实际需求，这样才能够更有效的验证，并且不会出现原液浪费的现象，通过加强检验环节的调节控制，能够更快速的完成无菌检查任务，6组试剂中要有对照组，将所得到的检验结果与对照组进行比较，判断参数结果的准确度。取供试品6瓶用0.9%无菌氯化钠溶液90mL溶解，混匀，于集菌仪上通过一副KDGB220集菌培养器中的一联滤筒中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次100mL，在最后一次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤，然后泵入100mL培养基，并加入约500万U的头孢菌素酶。在另一滤筒中泵入100mL培养基，并加入等量的试验菌，作为阳性对照。每种试验菌及相应的培养基同法逐一处理。另取一副KDGB220集菌培养器，分别泵入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基至两个滤筒中，作为阴性对照。上述集菌培养器分别置规定温度培养3～5d。
3、供试品测定
试验结束后要对器皿中的菌液进行清理，并采取有效的方法来判断最终结果是否与规定标准一致。在制药环节中无菌检查是保障药品质量的有效措施，通过加强各个环节的监管体系落实能够更好的提升产品质量，帮助技术人员判断生产环节中存在的问题，加快检查任务完成的速率。取供试品9瓶，用0.9%无菌氯化钠溶液140mL溶解，混匀，于集菌仪上通过一副KDGB330集菌培养器中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次300mL，共5次，在其中两管泵入各100mL硫乙醇酸盐流体培养基（其中一管接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌作为阳性对照），另一管泵入100mL的改良马丁培养基，并在每管中加入约500万U的头孢菌素酶。另取一副KDGB220集菌培养器，取上述溶剂和冲洗液同法操作，分并别泵入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基，作为阴性对照。将集菌培養器分别按规定温度培养14d，逐日观察并记录，结果供试品管和阴性对照管均澄清，阳性对照管在48h内菌生长良好，本实验结果成立。
三、讨论
头孢呋辛钠为头孢菌素类广谱抗生素，对敏感菌有较强的抗菌活性，故在该品种的无菌检查时，应采取适当的方法消除和破坏其抗菌活性。作者在摸索该品种薄膜过滤法实验条件时，在相同样品量的情况下，曾采取仅用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗的方式，供试品试验管在规定时间内有试验菌生长微弱、缓慢或不生长的情况。而采取用含适量头孢菌素酶的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗的方式，也存在某些供试品试验管的试验菌在规定时间内生长微弱、缓慢的情况，说明这两种方法均不能有效消除头孢呋辛钠的抗菌活性。只有采取本文中将适量头孢菌素酶加入培养基的方法，使酶与药品能充分地接触，酶解作用完全，得以有效地灭活滤器中残留头孢呋辛钠的抗菌活性，而且所需冲洗液的量和冲洗次数也较合适，从而确认头孢呋辛钠在本文试验条件下方法的可靠性，可以保证检验结果的准确可靠。
参考文献：
[1] 闵红，裴小龙，杨晓莉.3种规格注射用头孢地嗪钠无菌方法学验证[J].安徽医药，2013（05）.
[2] 柏大为，钱桂英.注射用头孢匹胺钠的无菌检查方法学研究[J].今日药学，2012（11）.