【摘 要】
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建立一种酶法高效测定厌氧发酵有机酸体系中NAD+和NADH的方法.利用酶循环机理,以1.0 mol/L Bicine buffer(pH8.0)、纯乙醇、40 mmol/L EDTA(pH8.0)、4.2 mmol/L MTT、16.6 mm
【机 构】
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南京工业大学制药与生命科学学院材料化学工程国家重点实验室,南京,210009
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建立一种酶法高效测定厌氧发酵有机酸体系中NAD+和NADH的方法.利用酶循环机理,以1.0 mol/L Bicine buffer(pH8.0)、纯乙醇、40 mmol/L EDTA(pH8.0)、4.2 mmol/L MTT、16.6 mmol/L PES和50μL的乙醇脱氢酶作为混合反应体系,采用紫外可见分光光度计在570 nm处测定吸光值变化情况,能将发酵体系中的NAD+和NADH准确定量,检出限分别为1.3×10-6mol/L和5.9×10-6mol/L,回收率分别在94%～98%和96%～101%范围内.能够快速、精确测定厌氧发酵体系中的NAD+和NADH含量,对于指导厌氧发酵体系辅酶代谢调控分析具有重要意义.
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