目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对兔膝关节软骨细胞体外增殖的影响,探讨SDF-1在软骨细胞凋亡过程中的作用.方法 体外分离培养兔膝关节软骨细胞并随机分为4组:对照组、50 μg/L SDF-1组、50 μg/L SDF-1+5 mg/L CXC趋化因子受体-4特异性拮抗剂(AMD3100)作用组、5 mg/L AMD3100处理组,采用噻唑蓝(MTT)比色法和测定细胞周期观察各组软骨细胞增殖.同时将各组置于250 μmol/L过氧化氢条件下作用2h,锥虫蓝染色计数软骨细胞存活率;测定各组中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的活力;流式细胞仪观察各组软骨细胞凋亡率的变化;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测凋亡的软骨细胞.结果 增殖实验中SDF-1组吸光度(A)值(0.504±0.024)均高于其他各组,且该组S+G2/M期细胞比例高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05).在凋亡方面,锥虫蓝拒染实验结果显示SDF-1组中细胞存活率高于其他3组(P<0.01):而 SDF-1 组膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)标记的细胞比例[(4.00±0.92)% 低 于其他各组(P <0.05);SDF-1组Caspase-3活力(40.03±2.56) nmolpNA/(h·mg)蛋白也较其他3组低(P<0.01):TUNEL实验中SDF-1组细胞核呈棕黄色的软骨细胞数低于其他各组(P<0.05).但各实验中SDF-1+ AMD3100组和AMD3100处理组与对照组比较,差异无统计学意义(P>005).结论 SDF-1可促进兔膝关节软骨细胞体外增殖,且在50 μg/L时软骨细胞增殖活性好,同时 SDF-1 在过氧化氢诱导的细胞凋亡条件下可保护软骨细胞免于凋亡。
基质细胞衍生因子-1对兔膝关节软骨细胞增殖和凋亡的影响
【摘 要】
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目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对兔膝关节软骨细胞体外增殖的影响,探讨SDF-1在软骨细胞凋亡过程中的作用.方法 体外分离培养兔膝关节软骨细胞并随机分为4组:对照组、50 μg/L SDF-1组、50 μg/L SDF-1+5 mg/L CXC趋化因子受体-4特异性拮抗剂(AMD3100)作用组、5 mg/L AMD3100处理组,采用噻唑蓝(MTT)比色法和测定细胞周期观察各组软骨细
【机 构】
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030001太原,山西医科大学第二医院骨科,030001太原,山西医科大学第二医院骨科,030001太原,山西医科大学第二医院骨科,030001太原,山西医科大学第二医院骨科,030001太原,山西医
【出 处】
:
中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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