【摘 要】
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目的制备一种共载基因和化学治疗药的硫辛酸(LA)修饰的以非内吞机制进入细胞的固有无序蛋白-细胞质定位的内化肽6(CL)的纳米复合物(LA-CL),并考察其在人胚肾细胞系HEK293细胞
【机 构】
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第二军医大学长海医院药学部,上海,200433;嘉兴市妇幼保健院药学部,浙江,314050;上海交通大学医学院附属新华医院药学部,上海,200093;
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目的制备一种共载基因和化学治疗药的硫辛酸(LA)修饰的以非内吞机制进入细胞的固有无序蛋白-细胞质定位的内化肽6(CL)的纳米复合物(LA-CL),并考察其在人胚肾细胞系HEK293细胞的转染效率、细胞摄取情况及其体外释放规律。方法以不同比例(2.5%、5%、10%、20%)半胱氨酸作为交联剂,合成4种不同交联度的LA-CLss,分别命名为LA-CLss1~LA-CLss4,并用核磁共振氢谱(1HNMR)和凝胶色谱鉴定。取增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)和LA-CLss以不同氮磷比(N/P,2.5、5、10、20、40、80)自组装形成纳米复合物,用激光粒度测定仪测定复合物的粒径和zeta电位,琼脂糖凝胶电泳测定载体LA-CLss对pEGFP的包裹能力和保护能力。用超声乳化法制备载多西他赛(DTX)的载药胶束,并用芘荧光探针光谱法测定LA-CLss3的临界胶束浓度。将LA-CLss/pEGFP纳米复合物与HEK293细胞共同培养,考察不同交联度复合物的细胞转染情况。结果 1HNMR结果确定LA-CLss合成成功。N/P=40时,HEK293细胞对LA-CLss3/p EGFP的转染效率高于LA-CL、LA-CLss1、LA-CLss2、LA-CLss4与pEGFP形成的复合物。超声乳化法制备的载药胶束包封率为(85.25±0.04)%,载药量为(8.81±0.02)%。细胞摄取结果表明,该载体可以有效地将基因递送至细胞内。体外释放实验结果表明,该多肽胶束具有还原性条件敏感释药行为。结论制备的LA-CLss/DTX/p EGFP纳米复合物有望成为一种高效的共载基因和化学治疗药的载体。
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