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【摘要】目的：对太子参抗二型糖尿病多糖活性部位（PF40），进行分离纯化得到均一多糖并对其进行结构表征。方法：太子参粉碎后，通过水提醇沉法（40%乙醇）得到太子参粗多糖，采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱对其分离纯化，得到一种均一多糖，采用高效凝胶渗透色谱法测定分子量，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）-柱前衍生高效液相色谱法分析单糖组成。结果：分离得到一种均一多糖，由葡萄糖组成，分子量为18400Da，命名为HPh-1-1。结论：太子参均一多糖HPh-1-1是一种葡聚糖。
【关键词】太子参均一多糖；分子量；单糖组成
【中图分类号】R248.2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0011-02
Isolation and Characterization of Pseudostellaria heterophylla polysaccharideYANG Bin1PANG Wensheng1HU Juan1，2*
1.The college of Pharmacy， FuJian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350122，China；
2.Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350003， ChinaAbstract：ObjectiveTo further purified and characterized of Pseudostellaria heterophylla polysaccharide. Methods After crushing Radix Pseudostellariae， the polysaccharide was extracted by water and ethanol precipitation method（40% ethanol）. The column of Cellulose DE-52 and Sephacryl S-300HR was used to separate and purify it. High performance gel permeation chromatography（HPGPC） was used to analyze the average molecular weight， high performance liquid chromatography（HPLC） of 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone（PMP） pre-column derivatization was used to analyze its monosaccharide components. ResultsA novel homogeneous polysaccharide， named as H-1-1， was obtained. The mean molecular weight of HPh-1-1 was 18400Da and it was only composed of glucose. ConclusionThe Pseudostellaria heterophylla homogeneous polysaccharide HPh-1-1 was a kind of dextran.
Keywords：Pseudostellaria Heterophylla Polysaccharide；Molecular Weigh；Monosaccharide Components
太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla（Miq）Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺作用[1]。多糖是太子参重要活性成分之一，研究表明，太子参多糖具有降低血糖、血脂[2～3]、改善胰岛素抵抗[4]等功效。课题组前期对太子参粗多糖以40%的乙醇沉淀，经药理实验验证，得到其抗二型糖尿病活性部位（PF40）[5]。本研究采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱层析方法，对PF40进行分离纯化，得到均一多糖；并分析其分子量及单糖组成，为进一步探讨太子参多糖的化学组成及药理相关性研究奠定基础。
1仪器与材料
11仪器Ultimate 3000高效液相色谱仪（Dionex公司）；UV-3200型紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；MOKULYOD-230型冷冻干燥仪（Thermo Fisher公司）；层析柱（上海锦华层析设备厂）；HL-2D定时数显恒流泵；DBS-100电脑全自动部分收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）；AE240S型電子分析天平（梅特勒-托利多有限公司）；BC-R501B旋转蒸发器（上海生物化工设备有限公司）；HH-4型恒温水浴锅（国华电器有限公司）；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。
12材料太子参（福建柘参种业有限公司）；Cellulose DE-52（Whatman公司，批号：1030A024）；Sephacryl S-300HR（GE公司，批号：10222040）；葡聚糖分子量标准套（中国食品药品鉴定研究院，批号，201203）；D-葡萄糖、D-甘露糖（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20140117）；L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-阿拉伯糖（分析纯，Sigma公司，批号：20120203），乙腈（色谱纯，Merck公司，批号：608000203），1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、氯化钠、硝酸钠、无水乙醇、丙酮、浓硫酸、苯酚、浓盐酸、氢氧化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20140617）。 2方法与结果
21太子参均一多糖的提取与分离干燥太子参粉碎后过40目筛，经90%乙醇回流提取3次；药渣经水提3次，每次2h，过滤，滤液经减压蒸馏浓缩至原体积1/20；Sevage法脱蛋白，溶液经90%乙醇沉淀，离心；沉淀用蒸馏水溶解，以终浓度40%的乙醇沉淀；离心，沉淀经无水乙醇、丙酮反复洗涤后冷冻干燥，得PF40多糖。经Cellulose DE-52柱和Sephacryl S-300HR柱进一步分离纯化，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集水洗脱馏分，经浓缩、透析后冷冻干燥，得到1种均一多糖组分，命名为HPh-1-1，分离流程见图1。
3讨论
近年来，太子参多糖的研究在化学成分、药理等各方面都不断深入。本研究采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱联合应用对太子参多糖进一步分离提纯切实可行。分离出一种均一多糖HPh-1-1，通过高效渗透色谱法测得其分子量为18400Da，PMP-柱前衍生高效液相色谱分析表明HPh-1-1是一种葡聚糖。为太子参多糖化学结构和药理相关性进一步研究奠定了基础。参考文献
[1]王文凯，贾静，丁仁伟，等.太子参近年研究概况[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（12）：264-267.
[2] 姚先梅，段賢春，吴健，等.太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖、血脂代谢和肾脏病理的影响[J].安徽医药，2014（1）：23-26.
[3] 徐锦龙，徐爱仁，应景艳，等.太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖及胰岛素的影响[J].中华中医药学刊，2012（2）：423-424.
[4] 王琪，柴单单，吴晓华，等.太子参多糖减轻高脂诱导的小鼠肝脏胰岛素抵抗[J].中国病理生理杂志，2015，31（4）：685-689.
[5] Juan Hu，Wensheng Pang，Jinlong Chen，et al.Hypoglycemic effect of polysaccharides with different molecular weight of Pseudostellaria heterophylla [J].BMC Complementary And Alternative Medicine，2013，13（1）：267.
（收稿日期：2016-12-02编辑：梁志庆）
参考文献：按GB/T 7714-2015《信息与文献 参考文献著录规则》中的顺序编码制著录，依照其在文中出现的先后顺序用阿拉伯数字加方括号角标标出，并将序号置于方括号中，排列于文末。综述类文章参考文献应尽量在25条/篇以上。
基金项目：辽宁省大学生创新训练项目（NO：201410160005）
【关键词】太子参均一多糖；分子量；单糖组成
【中图分类号】R248.2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0011-02
Isolation and Characterization of Pseudostellaria heterophylla polysaccharideYANG Bin1PANG Wensheng1HU Juan1，2*
1.The college of Pharmacy， FuJian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350122，China；
2.Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350003， ChinaAbstract：ObjectiveTo further purified and characterized of Pseudostellaria heterophylla polysaccharide. Methods After crushing Radix Pseudostellariae， the polysaccharide was extracted by water and ethanol precipitation method（40% ethanol）. The column of Cellulose DE-52 and Sephacryl S-300HR was used to separate and purify it. High performance gel permeation chromatography（HPGPC） was used to analyze the average molecular weight， high performance liquid chromatography（HPLC） of 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone（PMP） pre-column derivatization was used to analyze its monosaccharide components. ResultsA novel homogeneous polysaccharide， named as H-1-1， was obtained. The mean molecular weight of HPh-1-1 was 18400Da and it was only composed of glucose. ConclusionThe Pseudostellaria heterophylla homogeneous polysaccharide HPh-1-1 was a kind of dextran.
Keywords：Pseudostellaria Heterophylla Polysaccharide；Molecular Weigh；Monosaccharide Components
太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla（Miq）Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺作用[1]。多糖是太子参重要活性成分之一，研究表明，太子参多糖具有降低血糖、血脂[2～3]、改善胰岛素抵抗[4]等功效。课题组前期对太子参粗多糖以40%的乙醇沉淀，经药理实验验证，得到其抗二型糖尿病活性部位（PF40）[5]。本研究采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱层析方法，对PF40进行分离纯化，得到均一多糖；并分析其分子量及单糖组成，为进一步探讨太子参多糖的化学组成及药理相关性研究奠定基础。
1仪器与材料
11仪器Ultimate 3000高效液相色谱仪（Dionex公司）；UV-3200型紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；MOKULYOD-230型冷冻干燥仪（Thermo Fisher公司）；层析柱（上海锦华层析设备厂）；HL-2D定时数显恒流泵；DBS-100电脑全自动部分收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）；AE240S型電子分析天平（梅特勒-托利多有限公司）；BC-R501B旋转蒸发器（上海生物化工设备有限公司）；HH-4型恒温水浴锅（国华电器有限公司）；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。
12材料太子参（福建柘参种业有限公司）；Cellulose DE-52（Whatman公司，批号：1030A024）；Sephacryl S-300HR（GE公司，批号：10222040）；葡聚糖分子量标准套（中国食品药品鉴定研究院，批号，201203）；D-葡萄糖、D-甘露糖（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20140117）；L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-阿拉伯糖（分析纯，Sigma公司，批号：20120203），乙腈（色谱纯，Merck公司，批号：608000203），1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、氯化钠、硝酸钠、无水乙醇、丙酮、浓硫酸、苯酚、浓盐酸、氢氧化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20140617）。 2方法与结果
21太子参均一多糖的提取与分离干燥太子参粉碎后过40目筛，经90%乙醇回流提取3次；药渣经水提3次，每次2h，过滤，滤液经减压蒸馏浓缩至原体积1/20；Sevage法脱蛋白，溶液经90%乙醇沉淀，离心；沉淀用蒸馏水溶解，以终浓度40%的乙醇沉淀；离心，沉淀经无水乙醇、丙酮反复洗涤后冷冻干燥，得PF40多糖。经Cellulose DE-52柱和Sephacryl S-300HR柱进一步分离纯化，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集水洗脱馏分，经浓缩、透析后冷冻干燥，得到1种均一多糖组分，命名为HPh-1-1，分离流程见图1。
3讨论
近年来，太子参多糖的研究在化学成分、药理等各方面都不断深入。本研究采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱联合应用对太子参多糖进一步分离提纯切实可行。分离出一种均一多糖HPh-1-1，通过高效渗透色谱法测得其分子量为18400Da，PMP-柱前衍生高效液相色谱分析表明HPh-1-1是一种葡聚糖。为太子参多糖化学结构和药理相关性进一步研究奠定了基础。参考文献
[1]王文凯，贾静，丁仁伟，等.太子参近年研究概况[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（12）：264-267.
[2] 姚先梅，段賢春，吴健，等.太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖、血脂代谢和肾脏病理的影响[J].安徽医药，2014（1）：23-26.
[3] 徐锦龙，徐爱仁，应景艳，等.太子参多糖对实验性糖尿病大鼠血糖及胰岛素的影响[J].中华中医药学刊，2012（2）：423-424.
[4] 王琪，柴单单，吴晓华，等.太子参多糖减轻高脂诱导的小鼠肝脏胰岛素抵抗[J].中国病理生理杂志，2015，31（4）：685-689.
[5] Juan Hu，Wensheng Pang，Jinlong Chen，et al.Hypoglycemic effect of polysaccharides with different molecular weight of Pseudostellaria heterophylla [J].BMC Complementary And Alternative Medicine，2013，13（1）：267.
（收稿日期：2016-12-02编辑：梁志庆）
参考文献：按GB/T 7714-2015《信息与文献 参考文献著录规则》中的顺序编码制著录，依照其在文中出现的先后顺序用阿拉伯数字加方括号角标标出，并将序号置于方括号中，排列于文末。综述类文章参考文献应尽量在25条/篇以上。
基金项目：辽宁省大学生创新训练项目（NO：201410160005）