【摘 要】
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目的 探讨miR-124对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响.方法 通过生物学软件TargetScan预测与miR-124结合的靶基因位点,利用含有结合位点的野生型(WT)和突变型(Mut)STAT33\'-UTR基因序列构建miR-124靶基因的双荧光素酶报告载体,并检测荧光素酶活性变化,试验分为4组:携带WT STAT3报告基因组(WTMimic组)、WT阴性对照组(WT NC组)、携带Mut STAT3报告基因组(Mut Mimic组)、Mu
【机 构】
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武汉市第三医院重症医学科,湖北武汉430074
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目的 探讨miR-124对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响.方法 通过生物学软件TargetScan预测与miR-124结合的靶基因位点,利用含有结合位点的野生型(WT)和突变型(Mut)STAT33\'-UTR基因序列构建miR-124靶基因的双荧光素酶报告载体,并检测荧光素酶活性变化,试验分为4组:携带WT STAT3报告基因组(WTMimic组)、WT阴性对照组(WT NC组)、携带Mut STAT3报告基因组(Mut Mimic组)、Mut阴性对照组(Mut NC组).建立大鼠H9c2心肌细胞H/R模型,用miR-124抑制剂(siRNA)转染H/R心肌细胞模型,试验分为4组:正常对照组、H/R模型组、H/R模型+miR-124抑制剂组、H/R模型+miR-124抑制剂+Stattic组(为miR-124靶基因的抑制剂).Western blot法检测心肌细胞中miR-124靶基因STAT3表达水平;实时荧光定量PCR法检测心肌细胞中miR-124 mRNA水平;流式细胞术检测miR-124对心肌细胞凋亡的影响;Western blot法检测miR-124对促心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果 STAT3是miR-124的1个靶基因;与WT NC组相比,WT Mimic组细胞荧光素酶活性明显降低(P＜0.05),而Mut Mimic组与Mut NC组无明显差异(P＞0.05).与正常心肌细胞组相比,H/R模型组心肌细胞STAT3蛋白表达水平明显降低,miR-124 mRNA水平明显升高(P均＜0.05),而转染miR-124抑制剂后,STAT3蛋白的表达部分恢复.与H/R模型组相比,H/R模型+miR-124抑制剂组心肌细胞凋亡水平及凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)表达均明显降低(P均＜0.05);而与H/R模型+miR-124抑制剂组相比,H/R模型+miR-124抑制剂+Stattic组心肌细胞凋亡水平明显升高(P＜0.05).结论 miR-124能够促进H/R诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与降低STAT3蛋白的表达有关.
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