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摘 要：本研究在标准方法《蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法》（NY/T 1725—2009）的基础上，省掉净化步骤，通过提取与浓缩，建立液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中的灭蝇胺分析方法。结果表明，采用简化后的前处理方法测定7种不同种类的样品，在0.01～1.00 mg/L范围内，加标回收率为78%～107%，标准偏差为2.8%～5.5%，其回收率和精密度都能达到分析检测要求。运用该方法对实际样品进行分析，操作简单，准确度高，可为蔬菜中灭蝇胺的批量快速检测方法研究提供数据参考。
关键词：液相色谱-串联质谱法;蔬菜;灭蝇胺
灭蝇胺（Cyromazine）是一种三嗪类化合物，属于强内吸性昆虫生长调节剂，极性强，具有触杀和胃毒作用。目前，灭蝇胺被广泛用于豇豆、菜豆、黄瓜和茄子等农作物的双翅目昆虫病虫害防治中[1]。
《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2019）[2]规定，灭蝇胺残留量指定的检验方法为《蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法》（NY/T 1725—2009）[3]（以下简称标准方法），但该方法的前处理步骤烦琐、溶剂消耗量大，耗时长，不适用于大批量检测工作。因此，本研究通过简化前处理步骤，建立了快速检测灭蝇胺残留的样品前处理方法，并采用高效液相色谱-串联质谱法分析测定，为不断探寻更优质、更快速的检测方法具有重要的指导意义[4-5]。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂
Agilent technologies 6460 Triple Quad LC/MS，配有ESI源，美国安捷伦公司;电子天平，奥豪斯有限公司;高速组织捣碎机，德国IKA公司;旋转蒸发仪，德国KNF。
灭蝇胺标准品，浓度为1 000 μg/mL，购自农业部环境质量监督检验测试中心（天津）;乙腈、甲醇、乙酸铵、甲酸、甲酸铵（色谱纯）;实验用水为屈臣氏蒸馏水。
大白菜、番茄、葱、蒜、香菇、西葫芦和山药，均购自于市场，经检测均为阴性样品;结球甘蓝为能力验证剩余样品（已知添加浓度）。
1.2 标准溶液配制
①灭蝇胺标准储备液：移取1 000 mg/L灭蝇胺标准溶液1 mL于100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，浓度为10 mg/L。②灭蝇胺标准中间液：移取1 mL标准储备液加入乙腈，定容至10 mL，配制成1 mg/L标准中间液。③灭蝇胺标准工作液：吸取100 μL标准中间液，加入900 μL空白基质，配制成0.1 mg/L的基质标液。
1.3 液相色谱-串联质谱仪器条件
1.3.1 色谱条件
色谱柱：Infinity Lab Proshell 120 EC -C18（2.7 μm，3.0×100 mm）;流动相：A-水（含5 mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸）、B-甲醇;梯度洗脱程序见表1，流速为0.4 mL/min，进样体积2 μL，柱温40 ℃。
1.3.2 质谱条件
离子源：AJS-ESI;扫描方式：正离子扫描;干燥气温度：285 ℃;干燥气流速：10 L/min;鞘气温度：375 ℃;
鞘气流速：12 L/min;雾化器35 psi;监测模式：多反应监测模式（MRM）;定量/定性离子对：167.1/85.1、167.1/68.1。
1.4 样品前处理
准确称取粉碎混匀后的试样20 g（精确到0.01 g），加入乙酸铵-乙腈（1+4）溶液均质、冲洗、过滤，并定容至100 mL具塞比色管中。用移液管准确移取10 mL提取液至圆底烧瓶中，旋蒸浓缩至只含水的溶液（冷凝装置无液滴滴下）。将只含水的溶液转移至带刻度线的10 mL样品小管，加水定容至5 mL，混匀过0.22 μm滤膜，上液相色谱-串联质谱仪测定。
与标准方法相比，省去了净化步骤，仅保留提取和浓缩步骤。
1.5 加标回收试验
选取大白菜、番茄、葱、蒜、香菇、西葫芦和山药7种空白基质，添加0.1 mg/L的标准溶液，平行测定6份，按上述前处理方法处理后上机测定，计算回收率和精密度。
2 结果与分析
2.1 线性范围
研究分析发现，灭蝇胺在0.01～1.00 mg/L范围内有良好的线性关系，线性方程为y=16.311 8x（其中，y为响应值;x为灭蝇胺的浓度，mg/L），线性相关系数r为0.999 4。
2.2 定量限
选取大白菜、香菇、蒜空白基质，添加浓度为0.010 mg/L的标准溶液，用上述方法平行测定6次，测得其平均回收率分别为92%、72%、75%，RSD分别为4.6%、5.4%、7.6%，其准确度和精密度符合检测要求，因此，将0.01 mg/L作为此方法灭蝇胺的定量限。
2.3 回收率和精密度
7种不同基质的加标回收和精密度结果见表2。从表2可以看出，在7种不同种类的基质中，灭蝇胺的回收率比较稳定，在78%～107%范围内，符合准确度要求;同时，RSD在2.8%～5.5%，符合精密度要求，满足检测分析要求。
2.4 实际样品分析
将能力验证的样品结球甘蓝（已知添加灭蝇胺的浓度为0.140 mg/L）用上述方法进行前处理后上机测定，测得其结果为0.147 mg/L。
3 结论
本研究通过改进标准方法中的前处理步骤，仅通过提取和浓缩，省略了净化步骤，建立了测定蔬菜中灭蝇胺残留量的液相色谱-串联质谱方法。该方法简单，快速、准确可靠，既可满足蔬菜中灭蝇胺残留的技术要求，又可用于大量样品的快速检测。但是，由于省掉了净化步骤，提取出的基质会比标准方法更复杂，对色谱柱和仪器的污染程度会更高一些。因此，在平时的检测过程中，要更加注意色谱柱的冲洗和仪器的维护保养。
参考文献
[1]刘瑛，余晟，于峰，等.灭蝇胺的毒性研究[J].农药，2000，39（9）：25-33.
[2]国家卫生健康委员会，中华人民共和国农业农村部，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量： GB 2763—2019[S].北京：中国农业出版社，2019.
[3]中華人民共和国农业部.蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法：NY/T 1725-2009[S].北京：中国农业出版社，2009.
[4]赵馨.QuEChERS方法在HPLC测定豇豆中灭蝇胺残留量的应用研究[J].福建农业科技，2020（8）：7-12.
[5]徐军，张盈，董丰收，等.超高效液相色谱-串联质谱法快速检测菜豆及土壤中的灭蝇胺残留[J].农药学学报，2012，14（6）：654-658.
关键词：液相色谱-串联质谱法;蔬菜;灭蝇胺
灭蝇胺（Cyromazine）是一种三嗪类化合物，属于强内吸性昆虫生长调节剂，极性强，具有触杀和胃毒作用。目前，灭蝇胺被广泛用于豇豆、菜豆、黄瓜和茄子等农作物的双翅目昆虫病虫害防治中[1]。
《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2019）[2]规定，灭蝇胺残留量指定的检验方法为《蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法》（NY/T 1725—2009）[3]（以下简称标准方法），但该方法的前处理步骤烦琐、溶剂消耗量大，耗时长，不适用于大批量检测工作。因此，本研究通过简化前处理步骤，建立了快速检测灭蝇胺残留的样品前处理方法，并采用高效液相色谱-串联质谱法分析测定，为不断探寻更优质、更快速的检测方法具有重要的指导意义[4-5]。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂
Agilent technologies 6460 Triple Quad LC/MS，配有ESI源，美国安捷伦公司;电子天平，奥豪斯有限公司;高速组织捣碎机，德国IKA公司;旋转蒸发仪，德国KNF。
灭蝇胺标准品，浓度为1 000 μg/mL，购自农业部环境质量监督检验测试中心（天津）;乙腈、甲醇、乙酸铵、甲酸、甲酸铵（色谱纯）;实验用水为屈臣氏蒸馏水。
大白菜、番茄、葱、蒜、香菇、西葫芦和山药，均购自于市场，经检测均为阴性样品;结球甘蓝为能力验证剩余样品（已知添加浓度）。
1.2 标准溶液配制
①灭蝇胺标准储备液：移取1 000 mg/L灭蝇胺标准溶液1 mL于100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，浓度为10 mg/L。②灭蝇胺标准中间液：移取1 mL标准储备液加入乙腈，定容至10 mL，配制成1 mg/L标准中间液。③灭蝇胺标准工作液：吸取100 μL标准中间液，加入900 μL空白基质，配制成0.1 mg/L的基质标液。
1.3 液相色谱-串联质谱仪器条件
1.3.1 色谱条件
色谱柱：Infinity Lab Proshell 120 EC -C18（2.7 μm，3.0×100 mm）;流动相：A-水（含5 mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸）、B-甲醇;梯度洗脱程序见表1，流速为0.4 mL/min，进样体积2 μL，柱温40 ℃。
1.3.2 质谱条件
离子源：AJS-ESI;扫描方式：正离子扫描;干燥气温度：285 ℃;干燥气流速：10 L/min;鞘气温度：375 ℃;
鞘气流速：12 L/min;雾化器35 psi;监测模式：多反应监测模式（MRM）;定量/定性离子对：167.1/85.1、167.1/68.1。
1.4 样品前处理
准确称取粉碎混匀后的试样20 g（精确到0.01 g），加入乙酸铵-乙腈（1+4）溶液均质、冲洗、过滤，并定容至100 mL具塞比色管中。用移液管准确移取10 mL提取液至圆底烧瓶中，旋蒸浓缩至只含水的溶液（冷凝装置无液滴滴下）。将只含水的溶液转移至带刻度线的10 mL样品小管，加水定容至5 mL，混匀过0.22 μm滤膜，上液相色谱-串联质谱仪测定。
与标准方法相比，省去了净化步骤，仅保留提取和浓缩步骤。
1.5 加标回收试验
选取大白菜、番茄、葱、蒜、香菇、西葫芦和山药7种空白基质，添加0.1 mg/L的标准溶液，平行测定6份，按上述前处理方法处理后上机测定，计算回收率和精密度。
2 结果与分析
2.1 线性范围
研究分析发现，灭蝇胺在0.01～1.00 mg/L范围内有良好的线性关系，线性方程为y=16.311 8x（其中，y为响应值;x为灭蝇胺的浓度，mg/L），线性相关系数r为0.999 4。
2.2 定量限
选取大白菜、香菇、蒜空白基质，添加浓度为0.010 mg/L的标准溶液，用上述方法平行测定6次，测得其平均回收率分别为92%、72%、75%，RSD分别为4.6%、5.4%、7.6%，其准确度和精密度符合检测要求，因此，将0.01 mg/L作为此方法灭蝇胺的定量限。
2.3 回收率和精密度
7种不同基质的加标回收和精密度结果见表2。从表2可以看出，在7种不同种类的基质中，灭蝇胺的回收率比较稳定，在78%～107%范围内，符合准确度要求;同时，RSD在2.8%～5.5%，符合精密度要求，满足检测分析要求。
2.4 实际样品分析
将能力验证的样品结球甘蓝（已知添加灭蝇胺的浓度为0.140 mg/L）用上述方法进行前处理后上机测定，测得其结果为0.147 mg/L。
3 结论
本研究通过改进标准方法中的前处理步骤，仅通过提取和浓缩，省略了净化步骤，建立了测定蔬菜中灭蝇胺残留量的液相色谱-串联质谱方法。该方法简单，快速、准确可靠，既可满足蔬菜中灭蝇胺残留的技术要求，又可用于大量样品的快速检测。但是，由于省掉了净化步骤，提取出的基质会比标准方法更复杂，对色谱柱和仪器的污染程度会更高一些。因此，在平时的检测过程中，要更加注意色谱柱的冲洗和仪器的维护保养。
参考文献
[1]刘瑛，余晟，于峰，等.灭蝇胺的毒性研究[J].农药，2000，39（9）：25-33.
[2]国家卫生健康委员会，中华人民共和国农业农村部，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量： GB 2763—2019[S].北京：中国农业出版社，2019.
[3]中華人民共和国农业部.蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法：NY/T 1725-2009[S].北京：中国农业出版社，2009.
[4]赵馨.QuEChERS方法在HPLC测定豇豆中灭蝇胺残留量的应用研究[J].福建农业科技，2020（8）：7-12.
[5]徐军，张盈，董丰收，等.超高效液相色谱-串联质谱法快速检测菜豆及土壤中的灭蝇胺残留[J].农药学学报，2012，14（6）：654-658.