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1 发病情况
2017 年3月4日，遂平县某养鹅场养殖的3000只6日龄扬州白鹅发病，开始出现个别雏鹅发病，第2 天鹅群的发病数量增多，出现40～50 只病鹅，之后每天都有150只左右的雏鹅发病，鹅群的病死率较高，可达70%～80%。鹅群发病后养殖人员采用了双黄连及环丙沙星饮水，鹅群的发病率有所控制，但发病鹅及死亡鹅的数量依然出现较多。养殖人员采集10只病死鹅病料，前来就诊。
2 临床症状及病变
发病雏鹅主要表现为精神沉郁，采食量下降，排出白色稀粪，有的病鹅出现咳嗽、气喘、呼吸困难等呼吸道症状，有的死前出现角弓反张、倒地震颤等神经症状。剖检病死鹅，主要表现为肺脏出血、淤血，气囊浑浊，肠管高度肿胀，剖开管腔可见灰白色纤维素性栓子，病情严重者其肠管纤维素栓子的长度可达20 cm 左右。
3 病原检测
3. 1 细菌分离鉴定 采用接种环，无菌取病死鹅的肺脏及肝脏，分别在普通培养基和鲜血培养基分区划线，37℃培养 18～24 h，观察菌落的形态。细菌培养的结果显示，普通培养基和鲜血培养基中均无任何细菌的生长，表明发病鹅群未感染细菌。
3. 2 病毒检测 无菌采集病死鹅的脾脏或肝脏，分别进行组织总DNA 和总 RNA 的提取。以其为模板，分别进行小鹅瘟病毒 （GPV） 、H9N2 禽流感病毒 （AIV） 、新城疫病毒 （NDV） 的常规PCR和RT-PCR扩增，PCR产物进行1.0 %琼脂糖凝胶电泳鉴定。GPV和 H9N2AIV 的PCR引物分别根据Gen Bank上发布的基因序列，比对后选取保守序列进行设计。GPV 的引物序列为： 上游引物： 5’ - CAACGCAGGATCAGACGAA -GAC - 3’， 下 游 引 物： 5’ - AGCGAACATGCTATG-GAAAGGA-3’，扩增目的基因大小为 314 bp。N9N2AIV 的引物序列为： 上游引物： 5’ - GGAGGTTGGT-CAGGATTAGTTG-3’，下游引物： 5’ - ACAAGAGAT-GAGGCGACAGT-3’，扩增目的基因大小为 560 bp。NDV 的检测引物采用国家标准，扩增目的基因大小为 500 bp左右。所有引物均由上海生物工程有限公司合成。扩增的目的基因送上海生物工程有限公司进行基因序列的测定。PCR 产物凝胶电泳结果显示，在310 bp 和 560bp 左右的位置出现了2条目的条带，而在 500 bp位置未出现任何条带。将扩增的 310 bp 和 560 bp 目的基因进行序列测定，测序结果与 Gen Bank 上发布的核苷酸序列比对分析，分析结果显示 310 bp 的基因序列与 GPV核苷酸序列的同源性可达 99. 9%，560bp 的基因序列与N9N2 AIV核苷酸序列的同源性可达99. 7%。因此，PCR 检测与测序结果表明，从病死鹅内脏器官中检测出了 GPV和 H9N2 AIV 两种病毒，未检测到 NDV。
4 诊断
根据鹅群的发病日龄、临床症状及病变特点，初步诊断该鹅群可能感染了GPV。实验室检测结果表明，从病死鹅体内没有分离到任何病原菌，PCR检测及目的基因测序结果显示，病死鹅的内脏器官中可检测到GPV和H9N2 AIV两种病毒。因此该鹅群最终确诊为GPV和H9N2 AIV两种病毒混合感染。
5 治疗
5. 1 抗体治疗 将病鹅隔离饲养，清洁鹅舍，保持鹅舍的通风。加强消毒，对鹅舍、料槽、水槽及周围环境用百毒杀溶液进行消毒，每天2 次，连续 1 周。剩余鹅群均注射小鹅瘟病毒的卵黄抗体，对尚未发病的鹅群每只注射 0. 5 m L，对已出现症状的每只注射 2 ～ 3 m L。抗体注射以后，新发病例的出现显著降低，病情轻微者明显好转。
5. 2 对症治疗 给予鹅群充足的饮水，同时在饮水中添加黄芪多糖或双黄连等抗病毒中药，配合头孢氨苄或环丙沙星抗生素防止出现细菌的继发感染。饮水中还可以添加电解多维、Vc 等，以增强机体的抵抗力。采取以上措施后，鹅群的发病和死亡均得到了有效的控制，有的病鵝逐渐康复，为鹅场大大降低了经济损失。
6 讨论
GPV 属于细小病毒科，细小病毒属的成员，为单股线性 DNA。该病毒基因组全长 5 106 bp，含有 2个开发阅读框 （ORF） ，ORF1 主要编码 2 种非结构蛋白 NS1 和 NS2，ORF2 编码 3 种结构蛋白 VP1、VP2 和 VP3。其中 VP3 蛋白是 GPV 主要的衣壳蛋白，含有多个抗原表位，能诱导机体产生中和抗体，因此该蛋白在 GPV 检测方法的建立及防治措施的研究方面有着重要的应用价值。本文 GPV 的检测根据 VP3 基因保守序列设计的特异性引物，通过PCR 扩增及序列测定的方法确定了鹅群 GPV 的感染。H9N2 AIV 属于低致病性流感病毒，该病毒宿主范围广，各种禽类均易感，感染后主要表现为呼吸道症状，肿眼、流泪，有的还出现抽搐、瘫痪等神经症状，剖检主要表现为肺脏出血水肿，气管中出现纤维素性渗出等。血凝素 （HA） 和神经氨酸酶（NA）是禽流感病毒主要的抗蛋白，在病毒感染过程中发挥着重要作用，能诱导机体产生具有保护作用的抗体。本文流感病毒的检测就是根据 HA 基因保守序列设计的特异性引物，通过 RT-PCR 扩增及序列测定的方法确定了鹅群 H9N2 AIV 的感染。
通过对发病鹅群临床症状及病变的观察，同时结合实验室检测，PCR 扩增和目的基因序列测定，最终确定了该鹅群为 GPV 和 H9N2 AIV 混合感染。小鹅瘟发病后的最佳治疗方式是抗体疗法，通过对剩余鹅群注射小鹅瘟病毒卵黄抗体治疗，同时采用对症治疗，鹅群的疫情很快得以控制，为鹅场降低了经济损失。本文通过鹅群GPV 和 H9N2 AIV 混合感染病例的诊断及治疗，为临床上鹅群传染病混合感染的诊治提供了技术参考。
（作者单位：463100河南省遂平县畜牧局）
2017 年3月4日，遂平县某养鹅场养殖的3000只6日龄扬州白鹅发病，开始出现个别雏鹅发病，第2 天鹅群的发病数量增多，出现40～50 只病鹅，之后每天都有150只左右的雏鹅发病，鹅群的病死率较高，可达70%～80%。鹅群发病后养殖人员采用了双黄连及环丙沙星饮水，鹅群的发病率有所控制，但发病鹅及死亡鹅的数量依然出现较多。养殖人员采集10只病死鹅病料，前来就诊。
2 临床症状及病变
发病雏鹅主要表现为精神沉郁，采食量下降，排出白色稀粪，有的病鹅出现咳嗽、气喘、呼吸困难等呼吸道症状，有的死前出现角弓反张、倒地震颤等神经症状。剖检病死鹅，主要表现为肺脏出血、淤血，气囊浑浊，肠管高度肿胀，剖开管腔可见灰白色纤维素性栓子，病情严重者其肠管纤维素栓子的长度可达20 cm 左右。
3 病原检测
3. 1 细菌分离鉴定 采用接种环，无菌取病死鹅的肺脏及肝脏，分别在普通培养基和鲜血培养基分区划线，37℃培养 18～24 h，观察菌落的形态。细菌培养的结果显示，普通培养基和鲜血培养基中均无任何细菌的生长，表明发病鹅群未感染细菌。
3. 2 病毒检测 无菌采集病死鹅的脾脏或肝脏，分别进行组织总DNA 和总 RNA 的提取。以其为模板，分别进行小鹅瘟病毒 （GPV） 、H9N2 禽流感病毒 （AIV） 、新城疫病毒 （NDV） 的常规PCR和RT-PCR扩增，PCR产物进行1.0 %琼脂糖凝胶电泳鉴定。GPV和 H9N2AIV 的PCR引物分别根据Gen Bank上发布的基因序列，比对后选取保守序列进行设计。GPV 的引物序列为： 上游引物： 5’ - CAACGCAGGATCAGACGAA -GAC - 3’， 下 游 引 物： 5’ - AGCGAACATGCTATG-GAAAGGA-3’，扩增目的基因大小为 314 bp。N9N2AIV 的引物序列为： 上游引物： 5’ - GGAGGTTGGT-CAGGATTAGTTG-3’，下游引物： 5’ - ACAAGAGAT-GAGGCGACAGT-3’，扩增目的基因大小为 560 bp。NDV 的检测引物采用国家标准，扩增目的基因大小为 500 bp左右。所有引物均由上海生物工程有限公司合成。扩增的目的基因送上海生物工程有限公司进行基因序列的测定。PCR 产物凝胶电泳结果显示，在310 bp 和 560bp 左右的位置出现了2条目的条带，而在 500 bp位置未出现任何条带。将扩增的 310 bp 和 560 bp 目的基因进行序列测定，测序结果与 Gen Bank 上发布的核苷酸序列比对分析，分析结果显示 310 bp 的基因序列与 GPV核苷酸序列的同源性可达 99. 9%，560bp 的基因序列与N9N2 AIV核苷酸序列的同源性可达99. 7%。因此，PCR 检测与测序结果表明，从病死鹅内脏器官中检测出了 GPV和 H9N2 AIV 两种病毒，未检测到 NDV。
4 诊断
根据鹅群的发病日龄、临床症状及病变特点，初步诊断该鹅群可能感染了GPV。实验室检测结果表明，从病死鹅体内没有分离到任何病原菌，PCR检测及目的基因测序结果显示，病死鹅的内脏器官中可检测到GPV和H9N2 AIV两种病毒。因此该鹅群最终确诊为GPV和H9N2 AIV两种病毒混合感染。
5 治疗
5. 1 抗体治疗 将病鹅隔离饲养，清洁鹅舍，保持鹅舍的通风。加强消毒，对鹅舍、料槽、水槽及周围环境用百毒杀溶液进行消毒，每天2 次，连续 1 周。剩余鹅群均注射小鹅瘟病毒的卵黄抗体，对尚未发病的鹅群每只注射 0. 5 m L，对已出现症状的每只注射 2 ～ 3 m L。抗体注射以后，新发病例的出现显著降低，病情轻微者明显好转。
5. 2 对症治疗 给予鹅群充足的饮水，同时在饮水中添加黄芪多糖或双黄连等抗病毒中药，配合头孢氨苄或环丙沙星抗生素防止出现细菌的继发感染。饮水中还可以添加电解多维、Vc 等，以增强机体的抵抗力。采取以上措施后，鹅群的发病和死亡均得到了有效的控制，有的病鵝逐渐康复，为鹅场大大降低了经济损失。
6 讨论
GPV 属于细小病毒科，细小病毒属的成员，为单股线性 DNA。该病毒基因组全长 5 106 bp，含有 2个开发阅读框 （ORF） ，ORF1 主要编码 2 种非结构蛋白 NS1 和 NS2，ORF2 编码 3 种结构蛋白 VP1、VP2 和 VP3。其中 VP3 蛋白是 GPV 主要的衣壳蛋白，含有多个抗原表位，能诱导机体产生中和抗体，因此该蛋白在 GPV 检测方法的建立及防治措施的研究方面有着重要的应用价值。本文 GPV 的检测根据 VP3 基因保守序列设计的特异性引物，通过PCR 扩增及序列测定的方法确定了鹅群 GPV 的感染。H9N2 AIV 属于低致病性流感病毒，该病毒宿主范围广，各种禽类均易感，感染后主要表现为呼吸道症状，肿眼、流泪，有的还出现抽搐、瘫痪等神经症状，剖检主要表现为肺脏出血水肿，气管中出现纤维素性渗出等。血凝素 （HA） 和神经氨酸酶（NA）是禽流感病毒主要的抗蛋白，在病毒感染过程中发挥着重要作用，能诱导机体产生具有保护作用的抗体。本文流感病毒的检测就是根据 HA 基因保守序列设计的特异性引物，通过 RT-PCR 扩增及序列测定的方法确定了鹅群 H9N2 AIV 的感染。
通过对发病鹅群临床症状及病变的观察，同时结合实验室检测，PCR 扩增和目的基因序列测定，最终确定了该鹅群为 GPV 和 H9N2 AIV 混合感染。小鹅瘟发病后的最佳治疗方式是抗体疗法，通过对剩余鹅群注射小鹅瘟病毒卵黄抗体治疗，同时采用对症治疗，鹅群的疫情很快得以控制，为鹅场降低了经济损失。本文通过鹅群GPV 和 H9N2 AIV 混合感染病例的诊断及治疗，为临床上鹅群传染病混合感染的诊治提供了技术参考。
（作者单位：463100河南省遂平县畜牧局）