【摘 要】
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目的:NPM1基因突变导致多种类型的血液肿瘤，其中最常见的是NPM1突变导致急性髓系白血病（AML）及间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）。构建这两种最常见的NPM1突变基因真核表达载体并分析其表达情况，对于研究NPM1突变与血液肿瘤发生的关系具有重要意义。方法:设计NPM1突变基因引物，通过重叠PCR扩增基因片段，并插入到pEGFP-N1载体，构建GFP-NPMc+及GFP-NPM-ALK真核表达载体
【机 构】
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湖北医药学院基础医学院病理生理学教研室
【基金项目】
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湖北医药学院研究生启动金项目（2020QDJZR026）； 大学生创新创业训练计划项目（S202110929009）；
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目的:NPM1基因突变导致多种类型的血液肿瘤，其中最常见的是NPM1突变导致急性髓系白血病（AML）及间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）。构建这两种最常见的NPM1突变基因真核表达载体并分析其表达情况，对于研究NPM1突变与血液肿瘤发生的关系具有重要意义。方法:设计NPM1突变基因引物，通过重叠PCR扩增基因片段，并插入到pEGFP-N1载体，构建GFP-NPMc+及GFP-NPM-ALK真核表达载体；转染GFP-NPM1突变载体到HEK293T细胞，荧光显微镜观察突变蛋白细胞定位情况；免疫印迹检测NPM1突变蛋白过表达对相关细胞信号通路的影响。结果:双酶切实验显示GFP-NPMc+和GFP-NPM-ALK真核表达载体构建成功；荧光显微镜观察显示NPMc+和NPM-ALK突变蛋白均主要定位于细胞质；免疫印迹结果显示NPM1突变能够激活PKC和ERK等信号通路。结论:成功构建了血液肿瘤中最常见的NPM1突变基因表达载体，并通过NPM1蛋白细胞定位的分析，我们认为NPM1突变蛋白共有的组成结构域NPM-N端可能在各种血液肿瘤发生中发挥重要作用。
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