【摘 要】
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酪醇是橄榄苦苷、红景天苷和羟基酪醇等许多重要价值天然产物的前体物质,建立一个酪醇高产的平台菌株具有重要意义.由于大肠杆菌(Escherichia coli)具有繁殖速度快、易于基因操作等优点,该研究选择E.coli BL21(DE3)作为宿主菌株.通过在质粒pRSFDuet-1中应用组成型启动子PcspA过量表达来自荷兰芹的芳香醛合成酶(aromatic aldehyde synthase,AAS),得到105.97 mg/L酪醇.在敲除苯丙氨酸竞争途径(pheA)、丙酮酸竞争途径(ptsG、crr、py
【机 构】
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江南大学 生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏 无锡,214122;未来食品科学中心(江南大学),江苏 无锡,214122
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酪醇是橄榄苦苷、红景天苷和羟基酪醇等许多重要价值天然产物的前体物质,建立一个酪醇高产的平台菌株具有重要意义.由于大肠杆菌(Escherichia coli)具有繁殖速度快、易于基因操作等优点,该研究选择E.coli BL21(DE3)作为宿主菌株.通过在质粒pRSFDuet-1中应用组成型启动子PcspA过量表达来自荷兰芹的芳香醛合成酶(aromatic aldehyde synthase,AAS),得到105.97 mg/L酪醇.在敲除苯丙氨酸竞争途径(pheA)、丙酮酸竞争途径(ptsG、crr、pykF)及对羟基苯乙酸(feaB)竞争途径以及解除反馈抑制(tyrR)的菌株中过量表达AAS,获得1055.36 mg/L酪醇.为了进一步强化代谢流,对E.coli来源的乙醇脱氢酶AdhE、AdhP、YahK及FrmA和酿酒酵母来源的Adh6进行了筛选.结果表明,酿酒酵母来源的Adh6表现最佳的脱氢酶活性,产生了1516.86 mg/L酪醇,产量提升了43.73％.基于启动子组合调控策略平衡代谢流,酪醇产量达到1810.46 mg/L,提升了19.40％.最后,对培养基中碳源浓度、氮源浓度以及CaCO3浓度进行优化,得到2120.58 mg/L酪醇,产量提升了17.13％.研究结果为后续采用发酵法生产酪醇和相关的下游产物奠定了良好的基础.
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