拮抗酵母GS316发酵液对冬枣保鲜效果研究及应用

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利用拮抗微生物对病原菌的抑制作用来防治植物病害,这种策略在果蔬采后病害生物防治中已被广泛接受和实施。本论文以实验室筛选保存的一株对交链孢菌有抑制作用的微生物菌株GS316,对其进行形态、生理生化特性以及离体抑菌效果分析,然后对菌体发酵液抑菌效应机制和保鲜效果进行研究。在此基础上,探究以发酵液为主成分研制的抑菌保鲜纸的抑菌持效性和应用效果,同时分离发酵液蛋白,试制蛋白保鲜纸,为探索生物防治的新型应用形式奠定基础。主要结果如下:(1)拮抗酵母GS316固体菌落光滑,近圆形,液体培养可产生菌膜;能够发酵葡萄糖、蔗糖、海藻糖,不能发酵乳糖、甘露醇和可溶性淀粉;氮源同化实验表明GS316能够同化硝酸铵、硫酸铵、尿素(脲),碳源同化实验表明该菌可同化六种糖:葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、甘露醇和可溶性淀粉。(2)菌体发酵液对交链孢菌丝生长和孢子的萌发均有抑制作用,电镜观察菌丝出现皱缩、弯曲、断裂甚至裂解消亡等现象,孢子出现皱缩、内含物逸出等现象,孢子萌发受到抑制,随后裂解甚至消亡。(3)发酵液能够抑制冬枣果实的自然发病率以及黑斑病害的扩展,且有效降低果实的失重率,减缓枣果可滴定酸含量和VC含量的下降,抑制枣果内还原糖含量的上升,并且能够使果实内的过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)保持较高的活性,降低多酚氧化酶(PPO)和多聚半乳糖醛酸酶(PG)的活性,使冬枣果实的营养物质在贮藏期间内保持较高的品质,增强枣果的抗病能力。(4)发酵液涂布成的保鲜纸能够有效抑制交链孢的生长。活体应用表明,发酵液保鲜纸经热风烘干并放置保存一个月后仍旧能够减少果实发病率,有效减轻冬枣果实伤口处病斑扩展,降低冬枣果实的失重率,延缓可滴定酸、Vc、还原糖以及可溶性固形物含量等营养物质流失,提高CAT及PAL酶活性,降低PPO和PG酶活性,增强果实抗病性,发酵液保鲜纸抑菌时效性较长。(5)盐析沉淀得到的发酵液粗蛋白分子量在14.4-22.0k Da和31-66.2k Da之间,能够有效抑制交链孢菌丝扩展。用该蛋白与1%明胶、1%水溶性壳聚糖涂布成抑菌蛋白保鲜纸,对交链孢生长能够起到抑制作用,且该保鲜纸表面胶状结构更为致密,能够很好地将抑菌蛋白物质留在纸上,提高该保鲜纸的抑菌能力。
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