阿仑膦酸—海藻酸钠负载柚皮素的骨靶向凝胶系统的构建及其抗骨质疏松作用的验证

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目的前期已对骨靶向给药治疗骨质疏松症进行了初步研究,本文选用中药骨碎补有效活性成分柚皮素作为研究药物,进行骨靶向凝胶系统构建,研究其骨靶向能力及抗骨质疏松效用。本文在前期控释药物载体的合成及应用的研究基础上进一步探究柚皮素通过骨靶向给药诱导成骨分化治疗骨质疏松可能,为中医药进一步现代化提供新的思路。方法(1)构建阿仑膦酸-海藻酸钠-柚皮素(Alen-SA-Ng)凝胶载药系统,并对其Zata电位、包封率、释药率、傅里叶变换红外光谱、物相图谱进行表征。(2)培养小鼠颅顶前骨成骨细胞(MC3T3-E1),将不同浓度的空载体、柚皮素、Alen-SA-Ng(5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL)与之共培养,通过CCK-8法检测对小鼠MC3T3-E1细胞活性的影响;(3)Alen-SA-Ng干预培养成骨细胞24小时后,提取细胞RNA,运用Q-PCR技术检测Alen-SA-Ng干预对成骨细胞成骨分化评价指标RUNX相关转录因子2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的影响。(4)荧光标记柚皮素,通过大鼠活体荧光技术,追踪药物体内分布,评价其骨靶向能力。结果(1)构建的骨靶向凝胶载药系统Alen-SA-Ng包封率约在90%,释药率约为70%,其表征Zata电位、红外光谱、物相图谱,证实载体的合成(2)CCK-8法结果显示制备的空载体略有毒性,柚皮素对MC3T3-E1细胞的增殖有一定的促进作用,20 μ g/mL和5 μ g/mL浓度时对细胞增殖效果显著,值得注意的是高浓度柚皮素对细胞有毒副损伤,而制备的Alen-SA-Ng对细胞无明显毒副作用,并对细胞的增殖起着一定的促进作用。(3)Alen-SA-Ng干预后,细胞的成骨分化指标Runx-2和OPN表达均有明显增强,ALP仅在高浓度增强明显,对OCN表达无显著促进。(4)大鼠活体荧光实验表明Alen-SA-Ng相较于直接给药柚皮素具备较强的趋骨性,具备骨靶向能力。结论骨靶向凝胶载药系统Alen-SA-Ng具备靶向能力,可诱导成骨分化治疗骨质疏松。
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