【摘 要】
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目的:探讨炎性牙髓组织中巨噬细胞的分布和表达,不同亚型巨噬细胞条件培养基对人牙髓干细胞（human Dental Pulp Stem Cells,h DPSCs）迁移、增殖和成牙本质、成骨分化的影响。方法:（1）选取44只8周龄SD大鼠,右侧上颌磨牙为实验牙,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导建立牙髓炎模型。实验设计:40只SD大鼠建立牙髓炎模型,将大鼠随机分为5组（每组8
【基金项目】
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SDF-1/CXCR4介导的PI3K/Akt信号通路对巨噬细胞调控牙髓新生组织细胞外基质的作用机制，编号:82060201，国家自然科学基金项目，2021.01-2024.12；
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目的:探讨炎性牙髓组织中巨噬细胞的分布和表达,不同亚型巨噬细胞条件培养基对人牙髓干细胞（human Dental Pulp Stem Cells,h DPSCs）迁移、增殖和成牙本质、成骨分化的影响。方法:（1）选取44只8周龄SD大鼠,右侧上颌磨牙为实验牙,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导建立牙髓炎模型。实验设计:40只SD大鼠建立牙髓炎模型,将大鼠随机分为5组（每组8只）,分别在建模后的第3、5、7、14、21天处死,取上颌骨进行组织学处理,苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosinstaining,HE）观察炎症程度和范围。免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色,检测CD86（M1型巨噬细胞标记物）、CD206（M2型巨噬细胞标记物）在炎性牙髓组织中的分布。选4只SD大鼠不做任何处理,作为正常对照。（2）体外对人髓系白血病单核细胞（human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1）采用不同的细胞因子进行刺激分化,获得M0、M1和M2巨噬细胞,分别取其培养基,记为M0CM、M1CM、M2CM。组织块法分离培养h DPSCs,通过成骨及成脂诱导分化鉴定其细胞干性。分别使用M0CM、M1CM、M2CM条件培养基培养h DPSCs,检测h DPSCs的迁移和增殖能力,在加有M0CM、M1CM、M2CM条件下分别矿化诱导h DPSCs,检测h DPSCs的成牙本质、成骨能力。结果:（1）LPS诱导的牙髓炎炎症程度和范围HE染色结果显示:LPS诱导牙髓组织产生炎症,随着时间的延长炎症严重程度增加,炎症范围扩大。（2）炎性牙髓组织中CD86和CD206的表达IHC染色结果显示:在LPS诱导牙髓炎症后3天,在炎症区域CD86表达呈强阳性,CD206表达较少,在炎症的前沿区域主要为CD206的表达,总体比较CD86的表达量明显的比CD206高,差异有统计学意义（P＜0.05）;5天时,在炎症区的血管周围有CD86和CD206的表达,CD206的表达量增高,但仍较CD86的表达量低,差异有统计学意义（P＜0.05）;7天时,炎症区域中CD86的表达减弱,CD206的表达量比CD86的表达量高,差异有统计学意义（P＜0.05）;诱导14天,CD86和CD206的表达量均减少,当炎症发展至大部分根髓或全部牙髓坏死时,仅根尖处有极少量CD86和CD206表达;在21天时,CD86、CD206的表达量与14天时基本一致。正常对照的牙髓组织中无CD86、CD206表达。（3）M0CM、M1CM、M2CM对h DPSCs的迁移、增殖、成牙本质和成骨分化的影响在12h和24h,M2CM促进h DPSCs的迁移作用最明显,其次依次为M1CM、M0CM,划痕愈合率最低的是对照组。组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）。在第3天,M1CM出现对h DPSCs的增殖有促进作用;第4天和第5天时,M2CM对h DPSCs增殖的促进作用最明显,其次为M0CM和M1CM;在第6、7天,M2CM对h DPSCs增殖的促进作用最明显,M0CM与对照组无差异,而M1CM对h DPSCs增殖活性呈抑制状态。差异有统计学意义（P＜0.05）。M0CM、M1CM、M2CM和对照组的h DPSCs在诱导后均有矿化结节形成,产生矿化结节最多的是M2CM组,M1CM组产生的矿化结节最少,差异有统计学意义（P＜0.0001）。28天矿化诱导后,q RT-PCR检测h DPSCs促进成牙本质、成骨分化相关OCN、DSPP基因的表达:与其他三组比较,M2CM组OCN、DSPP、ALP、DMP-1基因的相对表达量最高;与对照组相比,M1CM组OCN、DSPP、ALP、DMP-1基因的表达量降低,差异有统计学意义,（P＜0.0001）。结论:（1）LPS诱导可以诱导大鼠暴露的牙髓产生炎症,炎症严重程度和范围与时间成正比。（2）在LPS刺激牙髓组织第3和第5天时,CD86的表达占优势,提示在牙髓炎初始阶段,M1型巨噬细胞占优势。随着时间的推移,CD206的表达逐渐增强,在第7天时,CD206的表达占优势,提示在随着炎症程度的加重,M2型巨噬细胞成为主要参与者。当炎症发展至14天和21天时,组织出现坏死,CD86和CD206的表达均明显减弱。（3）巨噬细胞条件培养基可以促进h DPSCs的迁移,其中M2CM促进迁移的作用最明显。（4）M1CM短时间作用h DPSCs可以促进h DPSCs的增殖,M1CM长时间作用反而抑制h DPSCs的增殖。M2CM可以更长时间的促进h DPSCs增殖。（5）M2CM可以促进h DPSCs成牙本质、成骨分化,而M1CM则抑制h DPSCs成牙本质、成骨分化。
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