乳腺癌患者外周血骨髓源性抑制细胞及Treg细胞的检测及意义

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骨髓源性抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSC)是一组没有完全成熟的细胞,在抑制癌症免疫反应中扮演重要角色,是现阶段肿瘤免疫治疗的研究热点。MDSC水平升高会使患者肿瘤负担加重,导致其免疫治疗反应变差,进而造成生存率降低。MDSC通过控制T细胞的生长发育,诱发肿瘤微环境中抑制免疫反应的细胞形成,比如诱导调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)的增殖,从而抑制免疫应答。Treg能够有效控制机体的免疫反应,他通过抑制CD3+CD4+T细胞或CD3+CD8+T细胞的增殖活性,抑制机体的抗肿瘤免疫应答,Treg水平上升意味着预后不良。CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+细胞作为反映细胞免疫功能的关键指标,在肿瘤的进展及预后方面发挥作用。目的:本研究旨在分析乳腺癌患者骨髓源性抑制细胞、调节性T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞以及CD3-CD16+CD56+细胞的表达情况及各项指标与乳腺癌进展的相关关系,以探讨各项指标在乳腺癌治疗、预后中的应用价值。方法:1.选取2021年7月至2021年11月河北医科大学第四医院乳腺中心病房住院的乳腺癌患者253例,经剔除临床资料缺失者(67人)、实验室检查结果缺失者(72人),病理类型乳腺导管原位癌、乳腺浸润性小叶癌和乳腺浸润性微乳头状癌例数过少者(7人),最终将107例乳腺癌患者纳入统计分析中。选取33例健康人群作为对照组。收集所有入组对象的外周血。所有乳腺癌入组者均经组织学病理证实。2.收集患者的临床数据:包括年龄、性别、绝经与否、是否存在脉管侵犯、淋巴结转移情况,肿瘤的分子亚型、组织学分级,雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、雄激素受体(Androgen receptor,AR)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体2(Human epithelial growth factor receptor 2,HER-2)、Ki-67的表达水平。3.采用外周全血9色11参数流式细胞术检测乳腺癌患者及健康体检者MDSC和Treg表达水平,并且检测外周血淋巴细胞亚群中的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+细胞表达水平。4.本研究中所有的统计学分析均使用SPSS21.0统计软件进行,统计方法涉及参数检验和非参数检验。统计方法由正态性检验、方差齐性检验和统计描述确定。参数检验采用独立样本t检验和单因素方差分析方法,而非参数检验方式采用秩和检验统计方法。当计量资料呈现正态分布时,使用均数±标准差表示,组间比较采用方差分析进行。而当计量资料呈现其他形式时,采用中位数表示。对于差异有统计学意义的统计学指标再进行详细分析,其中组内样本采用多个独立样本的非参数检验开展两两互相比较。构建接受者操作特性曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC),根据曲线下面积(Area under curve,AUC)进行具体分析。P<0.05作为判断差异是否有显著性差异的标准。结果:1.通过流式细胞术检测,乳腺癌患者外周血中的MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC水平显著高于对照组,有显著性差异(P<0.05)。2.通过流式细胞术检测,乳腺癌患者外周血中的MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC以及Treg水平与年龄、绝经与否、组织学分级、脉管侵犯、分子亚型、ER水平、PR水平、Her-2水平、Ki-67水平、AR水平无显著性差异(P>0.05),与淋巴结转移情况有显著性差异(P<0.05)。淋巴结转移情况分组内部,不同分组之间MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC和Treg水平有显著性差异(P<0.05),存在淋巴结转移的患者MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC和Treg水平高于无淋巴结转移的患者。3.通过流式细胞术检测,乳腺癌患者CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞水平与相应参考区间比较有显著性差异(P<0.05),乳腺癌患者的表达水平低于正常参考区间。CD3-CD16+CD56+细胞的水平与相应参考区间比较没有显著性差异(P>0.05)。将乳腺癌患者按照淋巴结转移情况分组,CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+细胞的表达水平与淋巴结转移情况之间差异不具有统计学意义(P>0.05)。4.通过构建ROC曲线,结果显示:按照是否存在淋巴结转移进行分组,N0为未转移组,N1+N2-3的总和为未转移组,MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC、Treg、MDSC+Treg的组间比较有显著性差异(P<0.05),其中MDSC+Treg联合检测的AUC最大;N0组和N1组进行比较,MDSC、PMN-MDSC、Treg、MDSC+Treg的组间比较有显著性差异(P<0.05),其中MDSC+Treg联合检测的AUC最大;N0组和N2-3组进行比较,MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC、Treg、MDSC+Treg的组间比较有显著性差异(P<0.05),其中MDSC+Treg联合检测的AUC最大。结论:1.乳腺癌患者的MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC表达水平升高。有淋巴结转移的乳腺癌患者MDSC、PMN-MDSC、M-MDSC和Treg水平高于无淋巴结转移患者。外周血MDSC可能作为判断乳腺癌是否有淋巴结转移的一个较为敏感的指标,对监控乳腺癌的发生、发展和预后有指导意义。2.乳腺癌患者的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞水平下降,提示机体免疫受损,CD3-CD16+CD56+细胞水平无显著变化。CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3-CD16+CD56+细胞表达水平与淋巴结转移无明显相关。3.MDSC+Treg联合检测可以提高乳腺癌患者临床诊断和有无淋巴结转移的敏感性。
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