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本文分别采用平板涂布法(PC法)和聚合酶链式反应-变性凝胶梯度电泳(PCR-DGGE)方法对大连长海县大长山岛虫虾夷扇贝(Mizuhopectenyessoensis)养殖海区的表层海水、10m深海水、成年虾夷扇贝鳃中可培养菌和致病性弧菌的数量和种类的季节性变化进行了调查研究。用Real-Time PCR技术分析了虾夷扇贝LITAF基因的表达水平。经过统计分析,表层海水、10m深海水和虾夷扇贝鳃中,可培养菌最高值均出现于5-7 月,可培养菌数量最高值分别为 7.9× 1 05 cfu/mL、5.9×1 05 cfu/mL、1.2×1 05 cfu/g,致病性弧菌数量最高值分别为1.6×102 cfu/mL、1.7×102cfu/mL,8.7×10 cfu/g,其中水样的致病性弧菌数量于5-7月最高,而虾夷扇贝鳃中致病性弧菌数量于2-4月最高:最低值均出现于11月至次年1月,可培养菌数量最低值分别为1.8×105 cfu/mL、8.0×104cfu/mL、2.7×104 cfu/g,致病性弧菌数量最低值分别为 7.4 ×10 cfu/mL、6.7×10 cfu/mL、3.4×10 cfu/g。从季节性上来看,普遍为夏季最高,冬季最低,春秋两季介于二者之间,但虾夷扇贝的鳃中致病性弧菌数量为春季最高。采用PCR-DGGE技术对三种样品中细菌的优势菌群进行分析,我们共得到38条条带,经过克隆测序等步骤,我们得知这38株细菌,属于6类系统发育菌群14种菌属,6类系统发育菌群分别为γ-变形菌纲(γ-Proteobacteria),α-变形菌纲(α-Proteobacteria),拟杆菌门(Bacteroidetes),ε-变形菌纲(ε-Proteobacteria),厚壁菌门(Firmicutes),蓝细菌(Cyanobacteria);14属分别为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas),弧菌属(Vibrio),另枝菌属(Alistipes),嗜盐菌属(Halomicronema),α-变形菌属(α-Proteobacterium),聚球藻属(Synechococcus),藻青菌属(Cyanobacterium),拟杆菌属(Bacteroidetes),产微球茎菌属(Microbulbifer),芽孢杆菌属(Bacillus),弓形杆菌属(Arcobacter),黄杆菌属(Flavobacterium),布鲁氏菌属(Brumimicrobium),棕色螺菌属(Phaeobacter)。其中弧菌为最优势属,所占比例为23.68%。虾夷扇贝鳃中,细菌丰度最大的样本来自夏秋两季,各19条条带;10m深海水样品中,细菌丰度最大的样本来自夏季样品,产生了 17条条带;表层海水细菌丰度最大的样品同样来自夏季,为16条条带。通过以上分析,我们可以发现,夏季和秋季的虾夷扇贝鳃、10m深海水、表层海水三类样品中细菌种类均较春季和冬季丰富。根据虾夷扇贝抗菌免疫基因LITAF的EST序列,应用RACE技术克隆了虾夷扇贝LITAF基因的cDNA全长,并发现该基因具有四种可变剪接形式,对序列及编码的氨基酸进行生物信息学分析;用Rea1-Time PCR技术分析了虾夷扇贝LITAF基因的四种可变剪接形式 MyLITAFAS1、MyLITAFAS2、MyLITAFAS3、MyLITAFAS4 在不同组织中、注射致病菌后和季节性样品中的相对转录量(P<0.05)。MyLITAFAS1在肝胰脏中转录量最高,MyLITAFAS2、MyLITAFAS3在闭壳肌中转录量最高,MyLITAFAS4仅在肾脏中有所表达,说明该基因的表达具有组织特异性。注射致病菌后24h,MyLITAFAS1实验组与对照组的表达量差异大,注射致病菌后48 h,MyLITAFAS2、MyLITAFAS3实验组与对照组的表达量差异大,LITAF基因在机体受到外界病原菌侵染时表达量增加,说明其在抗菌免疫性方面可以发挥重要作用。