【摘 要】
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银鲳（Pampus argenteus）隶属鲈形目（Pereiformes）,鲳科（Stromateidae）,鲳属（Pampus）,是我国主要的海洋经济鱼种之一。在形态上,银鲳丧失了维持身体平衡的腹鳍结构。Hoxc6作为同源框（Homeobox）基因家族成员之一,能够参与胚胎时期身体轴向模式的形成及指定前肢/后肢的位置。本论文为探究银鲳腹鳍缺失与Hoxc6之间的关系,我们克隆并分析了Hoxc6
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银鲳（Pampus argenteus）隶属鲈形目（Pereiformes）,鲳科（Stromateidae）,鲳属（Pampus）,是我国主要的海洋经济鱼种之一。在形态上,银鲳丧失了维持身体平衡的腹鳍结构。Hoxc6作为同源框（Homeobox）基因家族成员之一,能够参与胚胎时期身体轴向模式的形成及指定前肢/后肢的位置。本论文为探究银鲳腹鳍缺失与Hoxc6之间的关系,我们克隆并分析了Hoxc6 cDNA全长序列;评估了Hoxc6mRNA和蛋白质在银鲳不同发育时期及成鱼不同组织中的表达;并通过原位杂交技术研究了Hoxc6的定位;同时,我们还在银鲳鳍条细胞水平进行了Hoxc6及其下游基因Tbx4的siRNA干扰实验,并用Real-time PCR检测了干扰Hoxc6及Tbx4后对其上下游附肢发育相关基因的影响。本硕士论文从定量、定位及功能分析三个角度明确了Hoxc6的时空表达特征及其对附肢发育基因的影响,为进一步解析银鲳腹鳍缺失的分子机制提供了理论依据。本论文主要研究成果如下:（1）克隆获得银鲳Hoxc6 cDNA全长3002bp,包括513bp的5’-UTR和1772bp的3’-UTR,其中长度为717 bp的开放阅读框（ORF）编码238个氨基酸。银鲳HOXC6蛋白包含一个Homeodomain及YPWM基序。银鲳与其他鱼类HOXC6蛋白序列的相似性在90%以上,与所述的两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类同源物的相似性也很高,可达70-80%,表明Hoxc6在进化过程中高度保守。（2）银鲳发育时期的定量结果显示,相较于7-19d仔稚鱼,Hoxc6在胚胎时期和1d仔鱼中有更高的表达,这是由于该基因在胚胎发育中扮演着重要调控因子。进一步,Hoxc6在眼囊期和脑分化期表达量最高,这可能是因为该阶段是Hoxc6行使功能的关键时期。此外,HOXC6蛋白水平在7-19d均很低,而银鲳腹鳍如果发生很有可能在此阶段,是否蛋白的低丰度导致了腹鳍定位失败?银鲳组织的定量结果表明,Hoxc6在所检测的成鱼8种不同组织中均有表达,且相较于脑和眼,Hoxc6在鳍组织中有更高的表达。说明其可能具有某种超越胚胎和幼鱼发育的潜在作用。（3）原位杂交实验结果发现,在1d仔鱼中,Hoxc6转录本在脑部及体轴的前部分区域强烈表达。而对于7/13/16/19d的银鲳仔鱼,转录本的表达区域明显被细化,在后脑、胸鳍和下颌均能见到明显表达,在假定的腹鳍区域也能见到微弱表达。该结果说明银鲳腹鳍缺失并不是因为在假定的腹鳍区域不表达Hoxc6,而可能是因为Hoxc6表达域的扩张对腹鳍发生产生了影响。（4）成功培养了银鲳鳍条细胞,并用NC-siRNA-FAM确定了最高的转染效率为75%左右。最佳siRNA干扰序列的筛选结果表明,Hoxc6-si338组和Tbx4-si539组抑制效率最高,分别为55.94%和60.50%。干扰Hoxc6表达后,Tbx4/Tbx5的水平显著性降低;降低Tbx4表达后,Fgf8/Fgf10的表达量又显著降低。该研究揭示了Hoxc6与Tbx4存在着正协同关系,而Tbx4又与Fgf8/Fgf10正相关。猜测Hoxc6可能是通过调控Tbx4,进一步影响Fgf8/Fgf10的形成。
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