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研究背景白芍为中医临床常用中药,以养血柔肝见长,是血虚肝郁证的首选药物。药理学及临床研究表明,白芍具有明显的补血、抗抑郁、镇痛、神经保护及免疫调节作用,可用于抑郁症、神经及关节性疼痛等疾病的治疗,作用十分广泛。芍药苷、芍药内酯苷是白芍中含量最高的两种单萜类成分,课题组前期研究结果表明,芍药苷、芍药内酯苷具有一定的补血、抗抑郁作用,同时在补血功效中对比赤芍研究发现,芍药苷是白芍的有效但非专属成分,而芍药内酯苷则是白芍的特征有效成分。此外,课题组基于中医基本理论,对符合中医证候特征的血虚肝郁证模型进行了探索,最终以辐照结合慢性束缚应激的方法成功建立了血虚肝郁证大鼠模型,并基于神经-内分泌-免疫（NEI）网络系统,从整体动物及细胞层面初步阐明了血虚肝郁证的病理特征。既往研究为明确血虚肝郁证证候本质、探讨白芍养血柔肝功效物质基础和作用机制奠定了基础,但中医证候多具有复杂性等特点,中药也具有多成分、多靶点的特性,因此有必要结合现代技术手段进行全面深入的研究。代谢组学技术是研究生物体内源性代谢物变化的一种方法,可以从整体角度对发病机制和药物的作用机制进行分析,与中医整体观和辨证论治的特点一致。研究目的基于以上研究背景,本课题将以NEI网络研究结果为基础,结合“证-效”相关理论,通过对血虚肝郁证的代谢组学分析,完善对血虚肝郁证实质的研究,同时分析白芍及有效成分芍药苷、芍药内酯苷对血虚肝郁证大鼠小分子代谢物的影响,深入阐明白芍养血柔肝作用机制和物质基础。研究方法及内容以辐照结合慢性束缚应激配合孤养的方法建立血虚肝郁证大鼠模型,并以行为学、生理生化指标对白芍及有效成分芍药苷、芍药内酯的养血柔肝功效进行评价,同时采用液质联用的代谢组学技术结合主成分分析等多变量统计分析的方法分析血虚肝郁证模型大鼠体内小分子代谢物含量变化,探讨证候本质,并在明确模型大鼠潜在生物标志物的基础上,研究白芍及其有效成分芍药苷、芍药内酯苷对差异代谢物的影响,明确药物作用机制。主要研究内容如下:1.基于血虚肝郁证大鼠模型的白芍养血柔肝功效研究实验大鼠随机分为四组,即空白组（KB）,模型组（MX）,逍遥丸组（XYW）,白芍组（BS）,以辐照结合慢性束缚应激配合孤养的方法建立血虚肝郁证大鼠模型,以逍遥丸为阳性对照药,通过观察白芍对模型大鼠行为学（敞箱及高架十字迷宫）、外周血象（白细胞、红细胞、血红蛋白）及HPA轴（促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素释放激素、醛固酮）的影响,结合“证-效”相关性,从药理学研究层面揭示血虚肝郁证病理特征,探讨白芍养血柔肝功效。2.基于白芍“养血柔肝”功效的芍药苷、芍药内酯苷作用研究以白芍为阳性对照药,通过观察芍药苷、芍药内酯苷对血虚肝郁证大鼠模型行为学及理化指标的影响,比较芍药苷、芍药内酯苷作用特点,探讨白芍养血柔肝功效的物质基础。3.血虚肝郁证模型大鼠代谢轮廓分析及白芍养血柔肝作用机制以液质联用技术结合主成分分析、偏最小二乘判别分析等多变量统计方法分析模型组大鼠血清中代谢物变化,筛选出可能的差异代谢物,MetaboAnalyst网站进行代谢通路分析,明确血虚肝郁证证候本质,并分析白芍对异常代谢物的调节作用,探讨白芍养血柔肝功效的作用机制。4.芍药苷、芍药内酯苷干预血虚肝郁证大鼠模型的血清代谢组学研究液质联用技术对血清样品进行检测,Progenesis QI软件进行峰识别、匹配和归一化等数据前处理,采用SIMCA软件进行数据分析,以变量重要性投影（VIP）＞1、T检验中P＜0.05筛选潜在生物标记物,MetaboAnalyst网站进行代谢通路及相关性分析,通过检测分析空白组、模型组、给药组大鼠血清代谢物差异,探讨芍药苷、芍药内酯苷干预血虚肝郁证大鼠模型的作用机制。5.芍药苷、芍药内酯苷干预血虚肝郁证大鼠模型的大脑皮层代谢组学研究采用代谢组学技术结合主成分分析方法观察大脑皮层组织中小分子代谢物变化,SIMCA、MetaboAnalyst软件对差异化合物进行筛选鉴定并分析相关代谢通路,探讨芍药苷、芍药内酯苷的养血柔肝作用机制。研究结果药理学研究结果表明血虚肝郁证模型大鼠糖水消耗量、敞箱及高架十字迷宫行为学活动明显降低（P＜0.05,0.01,0.001）;红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）含量有不同程度的降低（P＜0.05,0.01,0.001）;促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）、促肾上腺皮质激素释放素（CRH）含量明显升高（P＜0.01、0.001）,白芍、芍药苷、芍药内酯苷对上述指标均有一定的调节作用（P＜0.05,0.01）;代谢组学研究结果表明血虚肝郁证大鼠体内磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、氨基酸等小分子代谢物含量发生变化,白芍及有效成分芍药苷、芍药内酯苷可通过调节异常小分子代谢物含量影响相关代谢通路发挥养血柔肝作用。研究结论1.白芍及有效成分芍药苷、芍药内酯苷可通过调节行为学、外周血象、HPA轴等异常指标,发挥养血柔肝作用;2.血虚肝郁证模型大鼠涉及体内甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、氨基酸代谢等多条代谢通路异常,白芍及效成分芍药苷、芍药内酯苷可通过调节相关异常代谢通路发挥养血柔肝作用。综上,本课题基于“证-效”相关理论,以NEI网络研究结果为基础,自有专利技术为支撑,从系统生物学内源性代谢物变化的角度深入探讨了血虚肝郁证的证候本质,同时基于白芍“养血柔肝”功效,首次对其有效成分芍药苷、芍药内酯苷的作用从整体层面进行研究,进一步明确了白芍养血柔肝功效作用特点和物质基础。