【摘 要】
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目的:探究乌司他丁（Ulinastatin,UTI）和槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞活性的影响,并进一步明确UTI和槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原表达和TGF-β/Smad通路中关键因子表达的影响,同时探究两种药物联合使用是否会协同增强药效。方法:（1）瘢痕疙瘩成纤维细胞购于上海富雨生物科技有限公司,取生长对数期的P5细胞分成两个组别:（1）UTI组（7个浓度梯度,4个作用时间点）;（2）槲皮素组（7
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目的:探究乌司他丁（Ulinastatin,UTI）和槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞活性的影响,并进一步明确UTI和槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原表达和TGF-β/Smad通路中关键因子表达的影响,同时探究两种药物联合使用是否会协同增强药效。方法:（1）瘢痕疙瘩成纤维细胞购于上海富雨生物科技有限公司,取生长对数期的P5细胞分成两个组别:（1）UTI组（7个浓度梯度,4个作用时间点）;（2）槲皮素组（7个浓度梯度,4个作用时间点）。药物干预后通过CCK8法检测并绘制浓度-时间-效应曲线,以此计算获得两种药物的IC50值;（2）取生长对数期的P5细胞分成四个组别:（1）对照组:不使用药物干预（标记组别Control）;（2）乌司他丁组:2525U/ml UTI+瘢痕疙瘩成纤维细胞（标记组别UTI）;（3）槲皮素组:72μmol/L槲皮素+瘢痕疙瘩成纤维细胞（标记组别Quercetin）;（4）混合组:2525U/ml UTI+72μmol/L槲皮素+瘢痕疙瘩成纤维细胞（标记组别Mix）;使用细胞划痕实验检测药物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响,采用TUNEL法检测药物对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响,并进行对比;（3）取生长对数期的P5细胞分成四个组别,分组同前,通过Western Blot法对瘢痕疙瘩成纤维细胞中COL1、COL3以及TGF-β1的表达进行定性和定量分析。采用SPSS26.0软件对实验数据进行统计学分析。结果:（1）UTI对瘢痕疙瘩成纤维细胞的最佳IC50值为2526U/ml,作用时间为72h;槲皮素的最佳IC50值为65.64μmol/L,作用时间为96h;40μmol/L以下浓度的槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的活性反而有促进作用;（2）2526U/ml浓度的UTI和72μmol/L浓度的槲皮素均能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移,并促进其凋亡;但两种药物联用不能增强对迁移的抑制作用,反而会减弱对凋亡的促进作用;（3）UTI和槲皮素均能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞COL1、COL3和TGF-β1的表达,虽然两种药物联合使用增强了对TGF-β1的抑制作用,但却明显减弱了对胶原蛋白表达的抑制作用。结论:（1）UTI和40μmol/L浓度以上的槲皮素均能通过TGF-β1/Smad通路对瘢痕疙瘩成纤维细胞活性产生抑制作用;（2）槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的抑制作用比UTI更明显;（3）UTI在促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡以及抑制胶原表达方面相较于槲皮素更有优势;（4）两种药物联合使用时,在体外实验中并没有达到协同增强药效的作用。
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