【摘 要】
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宫内发育迟缓（Intrauterine Growth Retardation,IUGR）降低仔猪存活率和生长性能,给养猪业带来严重经济损失。胎盘血管生成异常阻碍氧气和营养物质的正常运输,导致胎盘无法向胎儿提供足够的营养物质,是引起仔猪IUGR的重要因素。在母体妊娠过程中,多胺是胎盘发育和胎儿生长发育必不可少的重要物质。然而究竟是何种多胺调控胎盘血管发育的作用及其调控机理尚不清楚。本研究选用初产屯昌
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宫内发育迟缓（Intrauterine Growth Retardation,IUGR）降低仔猪存活率和生长性能,给养猪业带来严重经济损失。胎盘血管生成异常阻碍氧气和营养物质的正常运输,导致胎盘无法向胎儿提供足够的营养物质,是引起仔猪IUGR的重要因素。在母体妊娠过程中,多胺是胎盘发育和胎儿生长发育必不可少的重要物质。然而究竟是何种多胺调控胎盘血管发育的作用及其调控机理尚不清楚。本研究选用初产屯昌母猪24头,分为妊娠前期（45 d）、妊娠中期（75 d）、妊娠晚期（110 d）3个组。分娩后再根据仔猪体重将胎盘进行分组,分为正常初生重仔猪组（Normal）和低初生重仔猪组（Low）,每组8个重复。通过高效液相色谱法测定了妊娠期不同阶段Normal组和Low组胎盘内腐胺、精胺和亚精胺的含量变化情况,筛选出显著变化的多胺。同时再检测胎盘内该多胺代谢途径相关氨基酸含量变化情况。然后以猪血管内皮细胞（PVEC）为研究对象构建细胞模型,采用CCK-8法、细胞划痕法和Matrigel基质胶成管法,研究该多胺对猪血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,并确定添加的最佳浓度。通过实时荧光定量PCR技术检测该多胺处理PVEC后细胞中的VEGF-A、FGF2、FGFR1、FGFR2、IL-8、MMP2、MMP3、MMP9和MMP14 mRNA表达水平,筛选出显著变化的基因。并通过Western blotting检测该基因蛋白质表达水平。再进一步从关键基因表达调控角度,通过在培养基中添加抑制剂和利用siRNA技术建立干扰基因表达细胞模型两种技术手段,探究该多胺调控PVEC血管生成的分子机制。试验结果如下:（1）精胺和亚精胺的含量随妊娠期的推进而升高。胎盘中腐胺的含量随妊娠期的推进而降低。在妊娠前期和妊娠中期,低初生重仔猪组胎盘腐胺含量显著低于正常初生重仔猪组（P＜0.05）。在妊娠前期和妊娠中期,与正常初生重仔猪组相比,低初生重仔猪组胎盘内鸟氨酸含量显著增加（P＜0.05）,而ODC mRNA表达量显著降低（P＜0.05）。（2）外源添加10μmol/L腐胺可显著促进PVEC增殖和迁移（P＜0.05）,且随着浓度的增加呈先上升后下降趋势。5μmol/L腐胺能显著促进PVEC管腔形成（P＜0.05）,10μmol/L腐胺能极显著促进PVEC管腔形成（P＜0.01）。腐胺组细胞中MMP9基因的mRNA表达量与对照组相比,显著增加（P＜0.05）。同时,外源添加腐胺可显著提高PVEC中MMP9基因的蛋白质表达水平（P＜0.05）。（3）在培养基中添加MMP9抑制剂（BB-94）建立MMP9干扰细胞模型,降低MMP9表达后再补充腐胺,并未促进PVEC增殖、迁移和管腔形成（P＞0.05）。siRNA技术建立MMP9干扰细胞模型,干扰MMP9表达后再补充腐胺,并未促进PVEC迁移和管腔形成（P＞0.05）。外源腐胺促进PVEC血管生成是由MMP9调控的,MMP9调控细胞迁移和管腔形成过程,但不参与细胞增殖过程。结论:胎盘中腐胺的含量随妊娠期的推进而降低。IUGR的发生与胎盘腐胺不足有关,低初生重仔猪胎盘腐胺含量显著低于正常初生重仔猪,这是由于鸟氨酸脱羧酶减少,使鸟氨酸无法正常脱羧生成腐胺。外源添加10μmol/L腐胺可促进猪血管内皮细胞细胞增殖、迁移和管腔形成,可显著提高细胞中MMP9基因的mRNA和蛋白质表达水平。MMP9基因通过调控细胞迁移和管腔形成两个过程,在介导腐胺促进猪血管内皮细胞血管生成中发挥了关键作用。研究结果不仅对于发现调控猪胎盘血管生成的营养物质具有重要的理论意义,同时也为减少IUGR仔猪的发生提供良好的营养调控手段和理论依据。
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