【摘 要】
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[目 的]1.通过侧脑室注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,探究一种新型的脑微出血（cerebralmicrobleeds,CMBs）动物模型构建方法的可行性。2.摸索出相对适宜的脂多糖剂量,既可成功诱导大鼠脑微出血又可满足大鼠存活48h,诱发急性脑微出血。3.通过侧脑室注射脂多糖诱导神经炎症制备脑微出血动物模型,探究神经炎症在脑微出血发病机制中的作用。[方法]1.24只成
【基金项目】
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中国脑卒中高危人群干预适宜技术研究及推广项目（GN-2016R005）；
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[目 的]1.通过侧脑室注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,探究一种新型的脑微出血（cerebralmicrobleeds,CMBs）动物模型构建方法的可行性。2.摸索出相对适宜的脂多糖剂量,既可成功诱导大鼠脑微出血又可满足大鼠存活48h,诱发急性脑微出血。3.通过侧脑室注射脂多糖诱导神经炎症制备脑微出血动物模型,探究神经炎症在脑微出血发病机制中的作用。[方法]1.24只成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为4组,每组6只,分别为对照组、50μg/10μl低剂量脂多糖组（50μg/10μl LPS组）、75μg/10μl中剂量脂多糖组（75μg/10μl LPS组）、100μg/10μl高剂量脂多糖组（100μg/10μl LPS组）,其中3个不同剂量脂多糖组分别予相应剂量脂多糖溶液,对照组予等体积的0.9%Nacl溶液,4组均为侧脑室单次给药,侧脑室注射位点为:前囟为原点,向后0.8mm、向右1.5mm,脑膜下进针深度3.8mm。2.给药后48h进行新物体识别实验（novel object recognition,NOR）和旷场实验（open field test,OFT）分别检测大鼠非空间记忆认知功能和运动活动功能。实验过程中记录大鼠存活情况。NOR和OFT结束后灌注取大鼠全脑组织,采用体视显微镜观察大鼠脑表面微出血点,采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色检测病理脑微出血（cerebral microhemorrhages,CMH）,采用免疫荧光（Immunofluorescence,IF）染色技术检测微出血部位星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）表达情况,Spearman 相关性分析GFAP阳性表达与病理微出血数量、大小的相关性。[结 果]1.大鼠存活率 实验期间对照组和50μg/10μl LPS组的6只大鼠均存活,存活率100%;75μg/10μl LPS组的6只大鼠死亡1只,存活率83.3%;100μg/10μl LPS的6只大鼠死亡3只,存活率50%。2.大鼠脑表面微出血检测结果 对照组大鼠未见脑表面微出血,3个不同剂量脂多糖组大鼠均存在明显可见的脑表面微出血,其中75μg/10μl LPS组、100μg/10μl LPS组与对照组相比差异具有统计学意义（p＜0.05）。3.HE染色病理微出血检测结果（1）病理微出血数量方面:HE染色结果显示,与对照组相比,3个不同剂量脂多糖组大鼠均诱导出多处病理微出血,数量差异具有统计学意义（p＜0.05）,其中75μg/10μl LPS组比50μg/10μl LPS组显著增多（p＜0.05）。（2）病理微出血大小方面:与对照组相比,75μg/10μl LPS组、100μg/10μl LPS组大鼠病理微出血面积显著更大（p＜0.05）;与50μg/10μlLPS组相比,75μg/10μl LPS组、100μg/10μl LPS组大鼠病理微出血面积显著增大（p＜0.05）。4.新物体识别实验检测非空间记忆认知功能结果 与对照组相比,50μg/10μl LPS 组、75μg/10μl LPS 组、100μg/10μl LPS 组大鼠对新物体探索时间和辨别指数均减少,但4组辨别指数差异不具有统计学意义（p＞0.05）。5.旷场实验检测运动活动功能结果 大鼠水平活动距离和垂直运动次数两方面结果显示,4组间差异不具有统计学意义（p＞0.05）。6.免疫荧光检测脑组织GFAP表达及其与脑微出血相关性分析结果 与对照组相比,75μg/10μI LPS组、100μg/10μl LPS组大鼠GFAP荧光表达显著增加（p＜0.001）。100μg/10μl LPS 组比 50μg/10μl LPS 组、75μg/10μl LPS组显著增加（p＜0.001）。Spearman相关性分析结果表明,大鼠大脑组织GFAP荧光表达量与病理脑微出血的数量（r=0.71,p＜0.01）、大小（r=0.67,p＜0.05）均具有相关性。[结 论]1.侧脑室注射脂多糖是构建脑微出血动物模型的新方法。2.75μg/10μl剂量的脂多糖是侧脑室单次注射诱发急性脑微出血的相对适宜剂量。3.通过神经炎症可以诱导脑微出血,神经炎症是脑微出血的发病机制之一。
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