钙网蛋白调控鼻咽癌细胞放疗抵抗的作用研究

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目的:分析钙网蛋白(Calreticulin,CALR/CRT)表达改变对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响,并探讨其分子机制,为鼻咽癌的治疗提供新的分子靶标。方法:CALR表达改变(过表达/沉默)的鼻咽癌细胞系给予电离辐射后,分别采用CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移与侵袭实验、划痕愈合实验、q RT-PCR、Western Blot等方法分析CALR表达改变对鼻咽癌细胞生物学行为和放疗敏感性的影响,以及放疗对CALR及其下游分子(p-STAT3、STAT3)表达的影响。结果:1.电离辐射(IR)可影响鼻咽癌细胞的CALR表达水平,CALR的表达水平随着放疗剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)的增加而升高,在10Gy时达到最高水平。2.电离辐射可呈剂量依赖性的抑制鼻咽癌细胞的增殖和克隆形成;CALR可促进鼻咽癌细胞的增殖与克隆形成。给予相同剂量的IR处理条件下,过表达CALR可促进放疗后鼻咽癌细胞的增殖及克隆形成能力,而敲低CALR显著抑制鼻咽癌细胞的增殖,鼻咽癌细胞的克隆形成数目明显减少。提示CALR可促进放疗后鼻咽癌细胞的增殖和克隆形成,削弱鼻咽癌细胞的放疗敏感性。3.CALR可以促进鼻咽癌细胞的侵袭、迁移能力,敲低CALR抑制了鼻咽癌细胞的侵袭、迁移能力。采用Transwell侵袭和迁移实验检测了CALR表达量改变对IR照射后鼻咽癌细胞侵袭、迁移能力的影响,结果显示:无论是否给予IR,敲低CALR明显抑制了鼻咽癌细胞的侵袭和迁移能力,而过表达CALR可显著促进鼻咽癌细胞的侵袭、迁移能力,降低放疗敏感性。4.无论有无放疗,CALR可上调p-STAT3及STAT3的蛋白表达,提示CALR可能通过激活STAT3信号通路调控鼻咽癌细胞的放疗敏感性。结论:1.CALR可增强放疗后鼻咽癌细胞的增殖、侵袭与迁移,增强鼻咽癌细胞的放疗抗性;2.CALR增强鼻咽癌放疗抵抗的作用机制可能与激活STAT3信号通路有关。
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