【摘 要】
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本课题对包装材料引起的食品增塑剂残留可能导致的生殖毒性进行初步研究。在前人的研究基础上,选择结构差异较大,使用较广泛的增塑剂作为研究对象,以邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、双酚A（BPA）、壬基酚（NP）和己二酸二（2-乙基）己酯（DEHA）作为邻苯二甲酸酯类、双酚A类、烷基酚类和脂肪族二元酸酯类增塑剂的代表物,初步研究了增塑剂混合暴露可能带来的生殖毒性风险。主要研究结果如下:1.MCF-7细胞理想的
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本课题对包装材料引起的食品增塑剂残留可能导致的生殖毒性进行初步研究。在前人的研究基础上,选择结构差异较大,使用较广泛的增塑剂作为研究对象,以邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、双酚A（BPA）、壬基酚（NP）和己二酸二（2-乙基）己酯（DEHA）作为邻苯二甲酸酯类、双酚A类、烷基酚类和脂肪族二元酸酯类增塑剂的代表物,初步研究了增塑剂混合暴露可能带来的生殖毒性风险。主要研究结果如下:1.MCF-7细胞理想的培养条件为89%的DMEM培养基和10%的血清,在此条件下MCF-7细胞生长曲线表明其对数生长期在30 h～72 h,另外DMSO对细胞的最大无作用剂量为0.1%。2.采用MCF-7细胞增殖实验研究了DBP、BPA、NP和DEHA的雌激素活性,结果表明:（1）DBP极量为2.3×10-9mol/L（24 h）、1.7×10-7mol/L（48 h）、5.5×10-8mol/L（72 h）、1.4×10-7mol/L（96 h）,EC50为1.6×10-18mol/L（24 h）、2.7×10-11mol/L（48 h）、1.7×10-10mol/L（72 h）、2.6×10-10mol/L（96 h）。（2）BPA极量为6.6×10-10mol/L（24 h）、2.8×10-9mol/L（48 h）、2.8×10-9mol/L（72 h）、6.6×10-10mol/L（96 h）,EC50为1.1×10-11mol/L（24 h）、1.9×10-10mol/L（48 h）、1.0×10-11mol/L（72 h）、1.1×10-11mol/L（96 h）。（3）NP极量为6.6×10-10mol/L（24 h）、3.0×10-10mol/L（48 h）、1.5×10-9mol/L（72 h）、1.7×10-9mol/L（96 h）,EC50为3.5×10-12mol/L（24 h）、1.2×10-11mol/L（48 h）、7.8×10-11mol/L（72 h）、1.3×10-11mol/L（96 h）。（4）DEHA对MCF-7细胞增殖基本无影响。3.DBP、BPA和NP二元混合物拟雌激素活性联合效应的MTT实验结果如下:（1）DBP和BPA为加和作用,但72 h产生了轻度协同作用。（2）DBP和NP为加和作用。（3）BPA和NP为加和作用,而在24 h表现出轻度拮抗作用。4.流式细胞术实验表明:（1）单独暴露实验中DBP、BPA和NP均能够促进细胞进入S期,加快MCF-7细胞增殖,具有雌激素活性。（2）混合暴露实验中,DBP+BPA及DBP+NP的雌激素活性联合效应均表现为加和作用,而BPA和NP表现为轻度拮抗。5.采用Western blot法研究了DBP、BPA和NP的二元混合物对MCF-7细胞ERα和ERK,JNK,p38信号通路关键蛋白的影响。结果表明:（1）DBP、BPA和NP均能降低MCF-7细胞中ERα蛋白表达。在降低ERα表达方面,DBP+BPA和DBP+NP表现出协同效应,而BPA+NP为加和效应。（2）DBP、BPA、NP均能提高MCF-7细胞中ERK蛋白的表达量,混合暴露的联合效应类型均为协同。在促进ERK磷酸化作用方面,单剂量组与溶剂组差别不大,混合组中DBP+NP和BPA+NP比单剂量组略高,其联合作用为轻度协同作用。（3）DBP、BPA和NP可轻度抑制MCF-7细胞JNK蛋白表达,而混合暴露可促进JNK蛋白表达,BPA+NP的促进作用较为明显。DBP、BPA和NP能够显著促进MCF-7细胞JNK蛋白磷酸化,混合暴露效应更显著,联合效应均为协同作用。（4）DBP、BPA和NP均能促进MCF-7细胞p38蛋白表达,DBP+BPA可协同促进p38蛋白表达,DBP+NP,BPA+NP的联合效应均为加和作用。DBP、BPA、NP和DBP+BPA均能抑制MCF-7细胞p38蛋白的磷酸化,而DBP+NP,BPA+NP却能促进p38蛋白的磷酸化。研究发现DBP、BPA和NP主要通过经典核受体途径发挥雌激素效应,同时膜受体信号传导途径也参与了雌激素效应,其中影响较为显著的是JNK信号传导途径,将作为增塑剂雌激素效应机制进一步研究的重点。
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