【摘 要】
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目的:研究不同退变程度的人髓核组织中m6A去甲基化酶ALKBH5的m RNA及蛋白水平的表达差异性;探究过表达及干扰ALKBH5对髓核细胞增殖、凋亡、衰老功能及细胞外基质合成的影响;方法:收集2021年3月-10月内腰椎间盘退变突出患者、腰椎爆裂性骨折需行椎间融合患者（无明显椎间盘退变）接受手术切除的髓核组织标本共计20例作为研究对象,分为正常对照组（pfirrmann分级I级）和退变组（pfir
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目的:研究不同退变程度的人髓核组织中m6A去甲基化酶ALKBH5的m RNA及蛋白水平的表达差异性;探究过表达及干扰ALKBH5对髓核细胞增殖、凋亡、衰老功能及细胞外基质合成的影响;方法:收集2021年3月-10月内腰椎间盘退变突出患者、腰椎爆裂性骨折需行椎间融合患者（无明显椎间盘退变）接受手术切除的髓核组织标本共计20例作为研究对象,分为正常对照组（pfirrmann分级I级）和退变组（pfirrmann分级II-V级）,退变组根据pfirrmann分级分为轻度退变组（II-III级）和重度退变组（IV-V级）,其中正常对照组椎间盘髓核组织来源于腰椎爆裂性骨折需行椎间融合患者,退变组椎间盘髓核组织来源于腰椎间盘退变突出患者,通过Western-Blot技术检测样本中ALKBH5蛋白相对表达量,应用RTPCR技术检测样本中m6A去甲基化酶ALKBH5的m RNA含量,分析ALKBH5 m RNA及蛋白与椎间盘退变程度的关系。构建不同的慢病毒载体质粒,转染人体髓核细胞,分为五组:正常人髓核细胞组、ALKBH5过表达空载髓核细胞组、ALKBH5过表达髓核细胞组、ALKBH5干扰空载髓核细胞组、ALKBH5干扰髓核细胞组,对5组细胞利用CCK8实验检测细胞增殖能力,衰老相关的β-半乳糖苷酶实验检测髓核细胞衰老,流式细胞术检测髓核细胞凋亡;最后通过RT-PCR和Western-Blot技术检测转染髓核细胞中的去甲基化酶ALKBH5、金属蛋白酶13（MMP13）、II型胶原（collagen II）、聚集蛋白聚糖（aggrecan）、Adamts5的m RNA及蛋白表达水平。结果:正常组、轻度退变组、重度退变组中人髓核组织中m6A去甲基化酶ALKBH5的蛋白及RNA表达水平具有显著差异性（P＜0.05）;随着退变程度增加,ALKBH5的蛋白及RNA表达水平升高。过表达ALKBH5的髓核细胞较正常髓核细胞、空载体感染髓核细胞增殖水平下降、衰老比例增加、凋亡水平升高,MMP13、Admats5含量及表达水平升高（P＜0.05）;干扰ALKBH5的髓核细胞较正常髓核细胞、空载体感染髓核细胞增殖水平升高、衰老比例减少、凋亡水平下降,collagen II、aggrecan含量及表达水平降低（P＜0.05）。结论:人体髓核组织中m6A去甲基化酶ALKBH5的表达水平和椎间盘退变程度成正相关;ALKBH5可能通过参与调控髓核细胞的m6A修饰水平参与椎间盘退变。
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