目的:哺乳动物卵母细胞发育过程需要两次连续的减数分裂才能保证其正常发育,形成单倍体以利于得到双倍体合子。小鼠是与人类最接近的简单天然的哺乳动物模型,因此我们选择以小鼠卵母细胞作为研究对象。卵母细胞的发育特点是从GV期到GVBD期过度时会出现一个较长的阻滞时期,直到其受到卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）作用时才会成熟发生GVBD,称为生发泡破裂或者称此现象为卵母细胞减数分裂的恢复即双线期阻滞释放。使用特异性抑制剂探讨此期间对GVBD发生的影响,一方面可以解决发育生物学里有关细胞周期调控的问题,另一方面也可以明确相关蛋白激酶在GV向GVBD转换期间所发挥的重要作用。一些蛋白激酶在精确调控减数分裂过程中发挥了关键作用,其自身也产生各种磷酸化、甲基化和泛素化等修饰活动。我们都知道钙离子在卵母细胞减数分裂过程中是必不可少的第二信使,因此钙离子结合物钙调蛋白作为钙调蛋白依赖激酶磷酸化的上游因子,应该在卵母细胞减数分裂的恢复过程中起了重要作用,然而对钙调蛋白和钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ亚型在此期间的相互关系的阐述并不是十分清楚。因此在本研究中,我们探讨了CaMKII的亚型之一CaMKIIγ在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中发挥的作用,并进一步讨论在这一过程中CaM、CaMKIIγ、PKCδ可能存在的关系。通过使用CaM的特异性抑制剂观察其对CaMKⅡγ亚型的影响。相反,CaMKⅡγ对CaM的影响使用CaMKⅡγ的特异性抑制剂来检测,以明确CaM和CaMKIIγ在卵母细胞双线期阻滞释放期间的表达特点,也观察了PKCδ对CaMKⅡγ的影响。方法:1、观察添加不同浓度的抑制剂Calmidazolium chloride或SMP-114后细胞形态和存活状态并统计GVBD发生的百分数。2、q PCR检测CaM、CaMKⅡγ和CaMKⅡα在输卵管、子宫和卵巢组织内的不同转录水平。3、利用Western Blotting分析方法,使用不同浓度的Calmidazolium chloride或SMP-114处理细胞,比较处理组与对照组卵母细胞的CaMKIIγ和CaM的表达水平和定位变化4、免疫荧光实验确定细胞中CaM和CaMKIIγ蛋白表达的定位和不同时期的变化与特异性抑制剂处理之后相应蛋白分布的改变。结果:1、CaM、CaMKⅡα、CaMKⅡγ和PKCβ在小鼠输卵管、子宫、卵巢中m RNA的表达情况;输卵管与子宫中CaMKIIγm RNA表达量高于CaMKIIα和PKCβ;卵巢组织中CaM m RNA表达量明显高于CaMKIIα、CaMKIIγ和PKCβ。2、蛋白检测结果显示:CaM的表达在GV期GVBD期MII期依次下降;CaMKIIγ在GV期和GVBD时期的表达量明显高于MII期表达量。使用CaM抑制剂Calmidazolium chloride明显抑制p CaMKIIβγδThr287的表达,p＜0.05;使用CaMKⅡγ抑制剂SMP-114,CaM的表达无下降趋势;使用PKCδ抑制剂sotrastaurin下调p CaMKIIβγδThr287,p＜0.05。3、通过免疫荧光对不同蛋白在细胞中的定位和表达做分析,CaM与CaMKⅡγ均匀地在细胞质表达,p CaM Thr79/Ser81在GV期表达于核周,GVBD期表达于胞质,p CaMKⅡβ/γ/δT287两个阶段在细胞膜、细胞质和细胞核均有表达;使用Calmidazolium chloride抑制CaM不但明显降低了CaMKⅡγ的表达,而且将CaMKIIβ/γ/δT287在核区的分布移动到细胞质。然而当使用CaMKⅡγ抑制剂SMP-114处理卵母细胞时,CaM分布没有呈现明显改变;4、使用Calmidazolium chloride或SMP-114抑制剂处理GV期卵母细胞以后,卵母细胞培养4h时GVBD发生率明显下降,p＜0.05。结论:CaM可能在卵母细胞减数分裂恢复期间作为CaMKII上游调控子,影响CaMKIIγ的表达与分布,进而参与调控小鼠卵母细胞减数分裂期的恢复,同时PKCδ也可以参与对CaMKIIγ的调控。