目的:研究PXR拮抗剂SPA70逆转紫杉醇耐药非小细胞肺癌的机制。方法:体外实验方法:采用浓度梯度法建立紫杉醇耐药的A549细胞和H460细胞,标记为:A549/TR细胞和H460/TR细胞,采用Cell Counting Kit-8（CCK8）测得紫杉醇的半数有效浓度(IC50),计算耐药抗性。分别用溶剂、紫杉醇、SPA70、紫杉醇+SPA70处理A549细胞和A549/TR,H460和H460/TR两组细胞,进行集落形成实验,划痕实验,侵袭实验,细胞免疫荧光,Ed U检测,活性氧检测等实验。体内实验方法:在裸鼠皮下注射A549/TR细胞,建立荷瘤模型,肿瘤体积大于等于100 mm~3后,按体重随机分为对照组、紫杉醇组（5 mg/kg·bw）、SPA70组（30 mg/kg·bw）、联合干预组（5 mg/kg·bw紫杉醇+30 mg/kg·bw SPA70）,按分组腹腔注射相应的药物,待肿瘤达1000 mm~3处死各组裸鼠,观察裸鼠内部脏器是否异常,取下肿瘤,进行苏木素-伊红染色（HE）和免疫组化染色（IHC）检测相关蛋白。指标检测:（1）集落形成实验检测紫杉醇和SPA70对细胞增殖的作用。（2）划痕实验检测紫杉醇和SPA70对细胞迁移的影响。（3）流式细胞术检测紫杉醇和SPA70对细胞周期和凋亡的作用。（4）实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测PXR、Tat-interactive protein 60 k Da（Tip60）、Tumor necrosis factor（TNF-α）、nuclear factor kappa-B（NF-κB）、P-glycoprotein（P-gp）等m RNA水平的变化。（5）免疫荧光检测α-tubulin,hoechst33342、Propidium Iodide（PI）、4′,6-diamidino-2-phenylindole（DAPI）等指标的定位以及蛋白含量变化。（6）Western blot和Co-IP检测PXR、P-gp、Tip60、P-gp等相关蛋白的联系和蛋白水平的变化。（7）采用苏木精-伊红（HE）染色组织切片观察小鼠肿瘤组织病理改变以及免疫组化染色（IHC）检测相应指标。结果:体外实验结果:（1）集落形成实验结果显示:紫杉醇（1 n M）和SPA70（5μM）联合使用时抑制A549、A549/TR、H460、H460/TR细胞增殖的能力均大于紫杉醇（1 n M）和SPA70（5μM）单独使用时抑制细胞增殖的能力（P＜0.05）。（2）划痕实验结果显示:72小时后,对照组细胞完全覆盖划痕区域,紫杉醇（2n M）和SPA70（5μM）联合使用时A549、A549/TR、H460、H460/TR细胞覆盖面积明显小于二者单独使用时划痕区域的细胞覆盖面积（P＜0.05）。（3）侵袭实验结果显示:紫杉醇（2 n M）和SPA70（5μM）联合使用时A549、A549/TR细胞侵袭率小于SPA70和紫杉醇分别使用时的细胞侵袭率（P＜0.05）。（4）Western blot结果显示:SPA70（5μM）与紫杉醇（2 n M）联用时,PXR、P-gp、蛋白激酶B（Akt）、Tip60、RIP1、MLKL等蛋白表达降低,Cleaved-Parp、P-Akt、RIP3、P-MLKL、α-tubulin等蛋白表达均升高。（5）Co-IP和GST-pull down实验结果显示:PXR与Tip60结合并导致Tip60降解,最终导致α-tubulin乙酰化水平降低。（6）细胞免疫荧光实验显示:用SPA70或联合方案处理后细胞出现了多极核,α-微管蛋白之间呈桥连结构。（7）罗丹明123蓄积实验证明在SPA70和紫杉醇联合组中罗丹明123的积累也明显减弱。（8）染色质免疫沉淀实验（Ch IP）结果显示紫杉醇和SPA70联用使PXR与MDR1的启动子区分离,导致MDR1的m RNA表达显著降低。（9）Ed U检测结果显示:与对照组、紫杉醇组、SPA70相比,联合给药组中荧光强度明显减弱,结合前面的实验结果证明Ed U在S期的掺入也明显减少。体内实验结果:HE染色显示:与对照组相比,紫杉醇和SPA70联合组的肿瘤细胞失去完整形状,细胞核萎缩,甚至部分细胞膜丢失。IHC结果显示联合处理组的Ki67、P-gp、PXR和Tip60表达减弱,Cleaved-caspase-3表达增多。结论:PXR拮抗剂SPA70可以抑制紫杉醇耐药的非小肺癌细胞增殖,迁移和侵袭,并且克服非小细胞肺癌对紫杉醇的耐药现象。其具体机制为:SPA70和紫杉醇联合使用不仅降低P-gp的表达,还可以诱导PXR介导的Tip60发生降解导致α-微管蛋白的乙酰化水平降低,细胞有丝分裂障碍,最终导致细胞死亡。