【摘 要】
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生命早期,子代的肠道免疫的建立依赖于肠道菌群的发育与成熟,而子代生命早期的肠道菌群来源于母代。因此,在哺乳期对母鼠的肠道菌群进行破坏,能够显著影响仔鼠肠道菌群的建立与成熟,并进而影响肠道免疫屏障的完整性及功能。而研究表明,参苓白术散能调节肠道菌群紊乱和肠道免疫。本试验首先通过哺乳期时给予母鼠抗生素处理,探究母鼠肠道菌群紊乱对仔鼠肠道免疫的影响;随后在断奶期间对仔鼠使用参苓白术散,探究参苓白术散对仔
【基金项目】
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华南农业大学国家自然科学基金（项目编号:31472232、31602096）；
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生命早期,子代的肠道免疫的建立依赖于肠道菌群的发育与成熟,而子代生命早期的肠道菌群来源于母代。因此,在哺乳期对母鼠的肠道菌群进行破坏,能够显著影响仔鼠肠道菌群的建立与成熟,并进而影响肠道免疫屏障的完整性及功能。而研究表明,参苓白术散能调节肠道菌群紊乱和肠道免疫。本试验首先通过哺乳期时给予母鼠抗生素处理,探究母鼠肠道菌群紊乱对仔鼠肠道免疫的影响;随后在断奶期间对仔鼠使用参苓白术散,探究参苓白术散对仔鼠肠道免疫的影响,为母仔鼠之间的肠道免疫的联系做出一定的补充,并为畜牧业中调节仔畜的肠道免疫的药物提供一定的理论依据。本试验将9只怀孕17～18天SD母鼠,随机均分成3组,分别为CON组（CON组）、混合抗生素处理组（ABX组）、参苓白术散组（SLBZS组）,每组3只,每只母鼠单笼饲养,分娩后保留每组12只仔鼠。在母鼠分娩后,除CON组外,在ABX组和SLBZS组母鼠的饮水中添加混合抗生素,自由饮水14天。14天后,对SLBZS组仔鼠按仔鼠体重6g/kg的参苓白术散煎煮液进行灌胃,灌胃剂量为10 m L/kg,CON组与ABX组以等量无菌生理盐水灌胃。于分娩后第7天、第14天、第21天分别随机取每只母鼠的4只仔鼠,每组共12只进行体重称量及脏器指数的计算。试验结果显示,在第7天和第14天,ABX组的仔鼠体重显著低于CON组的仔鼠体重（P＜0.05）。第21天时,与CON组相比,ABX组的仔鼠体重显著下降（P＜0.05）;与ABX组相比,SLBZS组的体重显著增加（P＜0.05）,CON组的仔鼠体重之间没有显著差异（P＞0.05）。在第7天和第14天时,CON组和ABX组的仔鼠各脏器指数之间没有显著差异（P＞0.05）。在第21天时,各组之间的心脏、肺脏、肾脏的脏器指数没有显著差异（P＞0.05）;与CON组相比,ABX组肝脏指数与脾脏指数均显著降低（P＜0.05）;与ABX组相比,SLBZS组的脾脏指数显著升高（P＜0.05）,肝脏指数没有显著差异（P＞0.05）。结论:在断奶期间对仔鼠使用参苓白术散能调节肠道稳态失调仔鼠的生长发育不良。根据上述的结果,对第14天的CON组和ABX组,第21天的CON组、ABX组和SLBZS组的仔鼠粪便进行微生物群落多样性组成谱研究。试验结果显示,在第14天时,ABX组的α多样性显著低于CON组（P＜0.05）,且与CON组之间的β多样性区别明显。在第21天时,ABX组α多样性低于CON组;ABX组与SLBZS组之间的α多样性无显著差异（P＞0.05）。三组之间的β多样性区别明显。结论:在断奶期间对肠道稳态失调的仔鼠使用参苓白术散在一定程度上调节仔鼠的肠道菌群紊乱,并可能参与调节仔鼠体内的代谢过程。随后对通过Western Blot对第14天和第21天仔鼠结肠中ZO-1和Occludin蛋白的表达量进行检测。试验结果显示,在第14天时,ABX组与CON组的仔鼠结肠中ZO-1的灰度值没有显著差异（P＞0.05）;ABX组中的仔鼠结肠中Occludin的灰度值低于CON组（P＜0.05）。在第21天时,ABX组中的仔鼠结肠中ZO-1和Occludin的灰度值均低于CON组（P＜0.05）,SLBZS组中的仔鼠结肠中ZO-1和Occludin的灰度值高于ABX组（P＜0.05）。结论:在断奶期间对肠道稳态失调的仔鼠使用参苓白术散能上调结肠中紧密连接蛋白的表达,进而发挥调节肠道屏障的的作用。最后通过Western Blot和RT-PCR进一步对仔鼠结肠中的肠道炎症水平进行探究。试验结果显示,ABX组仔鼠结肠中的p-IKKα/β灰度值及TNF-α与IL-23的基因表达水平高于CON组（P＜0.05）。在第21天时,ABX组仔鼠结肠中的p-IKKα/β灰度值及TNF-α与IL-23的基因表达水平高于CON组;SLBZS组仔鼠结肠中的p-IKKα/β灰度值及TNF-α与IL-23的基因表达水平低于ABX组。结论:在断奶期间对肠道稳态失调的仔鼠使用参苓白术散能降低仔鼠结肠中的炎症水平。本试验结果表明,在哺乳期对母鼠使用抗生素能导致仔鼠肠道稳态的紊乱,并引起一定的肠道炎症。而在断奶期间对仔鼠使用参苓白术散则能改善仔鼠肠道稳态的紊乱,并降低仔鼠结肠中的炎症水平。
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