基于分子印迹技术生物酶传感器的设计、制备及选择性和稳定性的研究

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分子印迹聚合物(MIPs)已经证明了在无数实际应用中模拟自然识别的出色特性。最佳例子是基于诊断的免疫检测中替代天然抗体。分子印迹技术已经成熟到在不涉及动物研究的情况下,在选择性、稳健性和成本效益方面达到了类似甚至超过所要求的特点。因此,分子识别与生物酶相结合,提供了新的提高酶传感器选择性和探针灵敏度的方法。本论文具体工作内容如下:1.金属有机框架(MOFs)材料对生物酶的仿生矿化并联合分子印迹技术提升生物酶选择性在类似物检测中的性能本文通过仿生矿化将脲酶(Ur)和牛血红蛋白(BHb)包埋在金属-有机框架(MOFs)中,构建了具有优良Ur活性和类过氧化物酶活性的双功能纳米反应器。然后,过氧化氢在纳米反应器的催化下产生羟基自由基,在温和的条件下通过自发聚合在纳米反应器表面形成(MIPs)。结果表明,所制备的比色检测平台在尿素检测中的线性范围为0.08-20.00 m M,检出限(LOD)为0.02 m M。干扰实验证明,纳米反应器的传感结果基本不受污水和体液中尿素类似物和干扰物质的影响。在35天的稳定性测试中,该纳米反应器表现出良好的循环稳定性和长期稳定性。这种策略不仅可以大大提高酶的选择性,而且可以大大提高酶的利用率,降低生物酶的成本。2.通过金属氧化物仿生酶与生物酶构建级联催化体系并联合分子印迹技术提高生物酶的选择性在类似物检测中的性能。本文利用聚合物对酶的保护作用,利用葡萄糖氧化酶(GOx)与具有类似过氧化物酶催化活性的仿生酶构建的级联催化系统,在室温条件下在GOx表面制备了MIPs。然后,将分子印迹的GOx固定在高定向热解石墨(HOPG)电极表面,成功地获得了用于葡萄糖传感的电化学生物传感器。通过~1H NMR、扫描电子显微镜、电化学表征等系统证明了分子印迹GOx的成功制备及生物传感器的制备。研究发现,引入MIPs后,制备的生物传感器对葡萄糖的稳定性和选择性都增强了。此外,所制备的生物传感器可选择性地检测10.0μM-5.0 m M范围内的葡萄糖,LOD=5.0μM,与近年来报道的其他葡萄糖传感器相当或更好。
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