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研究背景:晚期前列腺癌转移绝大多数为骨转移,是该病致死的主要原因。研究显示前列腺癌骨转移与成骨细胞和破骨细胞的活动相关,然而目前前列腺癌骨转移的发生机制尚不明确。外泌体是细胞分泌的小囊泡,携带核酸、蛋白质、脂质等生物分子,进入体液循环后可到达远处。近年来的研究表明肿瘤细胞分泌的外泌体可到达转移部位参与转移前生态位的形成,促进肿瘤转移进展。实验方法:本研究所用外泌体通过两种方式获得,一种是收集小鼠前列腺癌细胞RM-1培养上清,利用超速离心法提取;另一种为前列腺癌患者血浆外泌体,是采用试剂盒提取。利用透射电子显微镜镜、Western Blotting、马尔文激光粒度仪表征等手段对外泌体进行特征鉴定。随后采用MTT法、碱性磷酸酶检测试剂盒、RT-qPCR实验、Von kossa等实验,检测RM-1外泌体和前列腺癌患者血浆外泌体对MC3T3细胞增殖和成骨分化的影响。将RM-1外泌体和前列腺癌患者血浆外泌体加入到RPMI-1640培养基中,先使其孵育MC3T3细胞20小时,随后收集上清液制成条件培养基以培养RM-1细胞,采用MTT实验、细胞划痕实验和平板克隆实验等方法检测条件培养基对RM-1细胞增殖活力、迁移能力及克隆形成能力的影响。结果:透射电镜（TEM）、马尔文粒径仪、Western Blotting实验显示我们提取物呈双凹碟状,粒径在30-150nm之间,携带GRP94、CD9、CD63等外泌体表面标志物,为外泌体;RM-1外泌体和前列腺癌患者血浆外泌体对MC3T3细胞的增殖和成骨分化的影响实验中,MTT实验发现两种外泌体均可不同程度地促进MC3T3细胞的增殖活力,碱性磷酸酶检测试剂盒、RT-qPCR实验、Von kossa实验显示其对MC3T3细胞的成骨分化无明显影响;经MC3T3刺激的RPMI-1640条件培养基可抑制RM-1细胞的增殖及迁移能力,但H-exo-CM（人前列腺癌患者血浆外泌体条件培养基）和M-exo-CM（鼠前列腺癌细胞RM-1外泌体条件培养基）组间无显著性差异,克隆形成实验表明C（空白对照组）、C-CM（对照处理组）、H-exo-CM和M-exo-CM组间无显著性差异。结论:RM-1外泌体和前列腺癌患者血浆外泌体可促进MC3T3细胞的增殖,但该实验条件下对MC3T3细胞的成骨分化无明显影响;MC3T3细胞的分泌物可抑制RM-1细胞的增殖和迁移,对克隆形成能力无明显影响,但是在本研究实验条件下无法说明外泌体是否可抵抗该作用。研究背景:肾透明细胞癌是泌尿系统中较为常见的癌症,目前关于它的研究还无法确定其发病机制。肾透明细胞癌是肾小管上皮细胞腺癌的一种,也是泌尿系统较为常见的癌症。临床上该类型肿瘤常常与颗粒细胞癌和梭形细胞癌混合存在,因此在诊断和分级方面存在较大困难,其发病机制尚未探明。本研究通过生物信息学方法,对影响肾透明细胞癌分级分期和预后的因素进行分析,确定了NDC80具有成为该类型肿瘤生物标记物的潜力。实验方法:使用Rstudio软件对GEO数据库中4个肾透明细胞癌数据集进行分析并计算高表达基因的差异,使用Venn Diagram找寻共同基因;筛选出的基因导入TRING数据库中,并使用Cytoscape软件筛选核心基因;采用CPTAC数据库对上述核心基因的蛋白表达水平进行验证;整合TCGA数据库中基因表达数据及病人生存预后数据,对筛选出来的基因作单因素及多因素生存回归分析和总体生存分析;使用GSEA软件对筛选出来的基因进行KEGG通路分析。免疫组化检测NDC80基因在肿瘤组织和癌旁正常组织的表达;Western Blotting检测NDC80在肾透明细胞系中的表达水平。使用siRNA敲低786-O和Caki-1细胞中NDC80蛋白表达后,行CCK8、划痕实验、Transwell小室实验、流式细胞术和Seahorse实验检测对细胞增殖活力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期和线粒体呼吸的影响。结果:从4个GEO数据集中共筛选出上调基因338个,蛋白-蛋白相互作用PPI网络分析挑选出1 0个核心基因,分别是ASPM,NUSAP1、CDK1、PBK、NCAPG、NDC80、KIF11、TTK、CCNA2 和 DLGAP5。经 CPTAC 数据库和 TCGA数据库验证,ASPM,CDK1,PBK,NCAPG,NDC80这5个基因在肾透明细胞癌中均高表达且与肾透明细胞癌患者较差的生存期相关。单因素和多因素回归生存分析及总生存分析显示仅有NDC80的表达可以预测癌症患者的生存预后情况。GSEA富集通路分析表明NDC80高表达与细胞周期通路和DNA复制相关,低表达可以负调控三羧酸循环过程。NDC80蛋白在肾透明细胞癌组织中高表达。用siRNA敲低786-O和Caki-1细胞中的NDC80后,抑制细胞增殖活力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期和线粒体呼吸功能。结论:NDC80在肾透明细胞癌组织中高表达,且与肾透明细胞癌患者的预后密切相关,具有预后标记物的潜力。体外实验结果表明NDC80可促进肾透明细胞癌的增殖、迁移、侵袭和线粒体呼吸功能,有可能作为抗癌新靶点。