【摘 要】
：
在日常生活中,感染幽门螺杆菌（Hp）的患者很多,这些患者会出现一些胃肠道疾病,近些年文献还报道了幽门螺杆菌感染与糖尿病等其他疾病有关,所以及时诊断出幽门螺杆菌感染是非常有必要的。虽然目前诊断其感染的方式有很多种,但是都不是令人十分满意。随着粪抗原检测技术的发展,我们发现通过制备幽门螺杆菌的单克隆抗体,然后检测粪便中的抗原进行诊断是一种很好的方式。而幽门螺杆菌的鞭毛蛋白A（FlaA）可作为临床诊断标
论文部分内容阅读
在日常生活中,感染幽门螺杆菌（Hp）的患者很多,这些患者会出现一些胃肠道疾病,近些年文献还报道了幽门螺杆菌感染与糖尿病等其他疾病有关,所以及时诊断出幽门螺杆菌感染是非常有必要的。虽然目前诊断其感染的方式有很多种,但是都不是令人十分满意。随着粪抗原检测技术的发展,我们发现通过制备幽门螺杆菌的单克隆抗体,然后检测粪便中的抗原进行诊断是一种很好的方式。而幽门螺杆菌的鞭毛蛋白A（FlaA）可作为临床诊断标志物,但目前国内外尚无识别FlaA蛋白的特异性抗体。本实验构建带His标签的HpflaA基因表达载体,以实验室常用的大肠杆菌为蛋白表达系统,得到HpFlaA重组蛋白,并根据重组蛋白的表达情况和标签采用合适的方法进行纯化。以纯化后的HpFlaA重组蛋白为抗原,免疫6-8周的BALB/C小鼠。细胞融合后用间接酶联免疫吸附实验筛选出继承亲本特性的杂种融合细胞。我们通过小鼠体内诱生腹水的方式得到大量抗体,采用ProteinG层析柱去纯化抗体以去除杂蛋白。对得到的纯度较高的抗体用间接ELISA的方式进行物理化学特性的鉴定。为了提高我们所制备的抗体的应用价值,我们采用棋盘滴定实验去筛选出较好的配对抗体以构建双抗体夹心体系。并对体系进行优化,测定体系的检测下限,并用构建的体系检测粪便临床样本。本论文共获得了 6株杂交瘤细胞,经间接ELISA验证,它们都能连续分泌对抗原具有特异性的抗体,我们将其分别命名为2G2,2G10,3E2,3E4,3F7和4H3,有5株为IgG1型,1株IgM型。经间接酶联免疫吸附实验和蛋白免疫印迹实验的结果可以得出结论,单克隆抗体对HpFlaA具有很好的特异性。5株IgG1型单克隆抗体亲和常数均达到107以上,效价均达到1:1.0×106且具有较好的纯度;我们建立的双抗体夹心体系可以检测到的最低抗原浓度为6.25 ng/ml;双抗体夹心体系检测8份临床样本,只有一份弱阳性样本漏检,其他样本检测结果均正确,且未出现假阳性。由此我们可以得出结论,本文得到的HpFlaA单克隆抗体具有潜在的临床应用价值。
其他文献
前哨淋巴结活检（SLNB）是早期乳腺癌腋窝分期的主要手段,需外科医生术中准确识别并切除前哨淋巴结（SLN）,在病理科医生的协助下行病理检查判断是否转移。然而,术后约3.5-10.9%的患者会出现手臂麻木、上肢水肿等手术并发症,影响生活质量。此外,对于年龄＞70岁、激素受体检查阳性的早期乳腺癌患者接受SLNB收益并不大。如何无创评估SLN转移以避免过度活检是亟待解决的临床需求。ICG荧光成像具有灵敏
目的:探讨表达CHRM5的上皮细胞在角膜新生血管形成过程中的作用。方法:利用碱烧伤、上皮大范围刮除、缝线三种方法建立损伤性的小鼠角膜新生血管和Corn1小鼠自发性的角膜新生血管模型,经裂隙灯及体视荧光显微镜检查眼表情况后,取角膜组织进行RNA和蛋白的提取、冰冻和石蜡及透射电镜切片样本的制备,以qRT-PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光或组化染色等方法检测CHRM5、ADRA1A、KRT12、KRT1
研究目的:本研究拟观察和探索激活肝X受体（liver X receptor,LXR）对慢性应激小鼠模型,包括慢性不可预见性温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）和慢性皮质酮喂养（corticosterone,CORT）,诱导小鼠抑郁样行为的改善作用与具体机制。研究方法:1.连续4 w分别建立CUMS模型和CORT模型,综合利用行为学,包括体重监测、
近年来,国家对石油企业等重工业企业提出供给侧改革的要求。对国内石油行业而言,产能过剩、成本过高,利润下降是供给侧的主要问题,也是改革的重点。目前,全球油价波动不定,石油钻井公司效益也逐年减少。石油钻井公司的市场发展空间较小,增加收入较困难,成本管理已经成为实现石油钻井公司长期盈利目标的关键因素。本文以Y钻井公司为研究对象,对其精细化成本管理问题进行深入研究,不仅有理论意义还具有实际意义。本文采用了
随着全球经济、科技的迅猛发展,伴随互联网线上快捷支付等方式的快速普及,我国银行业市场的竞争日趋激烈,银行为提高自身竞争优势,不仅要在产品、业务实力和管理水平的方面创新提高,同时还需要一个合适的绩效评价体系对员工的绩效情况进行公正、合理、科学有效地评价。绩效评价是企业管理体系的核心内容之一,是衡量企业的财务状况和经营成果的重要指标,为企业量身定制一套合适、合理、公正的绩效评价体系对于企业未来发展尤为
在经济全球化背景下,我国致力于建设创新型国家,发展高新技术企业,其中技术并购活动发挥了至关重要的作用,特别是跨国技术并购逐渐成为热潮。随着人口老龄化的加剧,医疗器械行业等关系国计民生的重点行业发展潜力巨大,而我国医疗器械行业起步较晚,导致许多行业内企业倾向于通过跨国技术并购来打破行业技术壁垒并寻求突破,而此种并购能否对主并企业的绩效产生影响成为人们关注的重点话题。本文以跨国技术并购与企业绩效的关系
全身性炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）是由特异性或非特异性刺激于机体从而产生一种失控的全身级联性炎症反应,是临床上导致患者死亡的重要因素。临床和实验数据表明慢性和急性全身促炎症过程均影响中枢神经系统功能,会导致短暂或永久性躯体、认知或情绪功能障碍。目前,炎症参与中枢神经系统功能障碍的形式和机制仍不是特别清楚。肿瘤坏死因子α（
Nur77是核受体超家族的重要成员之一,在调控肿瘤细胞生存和凋亡中起重要作用。本课题组在Science,Cell和Cancer Cell等杂志报道了 Nur77从细胞核转运至线粒体,与Bcl-2相互作用,诱导其从促生存因子转为细胞杀手,Nur77-Bcl-2调节剂有望成为抗肿瘤药物开发的重要方向。近期本课题组率先报道了第一个能够与 Nur77直接结合,调控Nur77-Bcl-2-线粒体通路,诱导肿
研究目的睑板腺功能障碍（MGD）是一种以终末导管阻塞或腺体分泌脂质的质或量的变化为特征的慢性弥漫性睑板腺功能异常,是多种眼表疾病的诱因。硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）缺乏被认为是导致MGD的原因之一,但缺少相关研究。本研究旨在展现SCD1缺乏小鼠睑板腺的具体组织病理学变化,并揭示SCD1缺乏诱导MGD的内在机制。研究方法建立SCD1敲除小鼠模型,以裂隙灯、体式显微镜、HE染色、油红O染色观察敲
目的:探究NDR1影响前列腺癌细胞EMT进程及前列腺癌转移的机理。阐明NDR1在前列腺癌细胞中调控FBXO11及β-catenin的具体分子机制。方法:我们通过数据库查询与分析总结了 NDR1、FBXO11及β-catenin三个基因的表达水平与前列腺癌进展与转移的关系;分子克隆与质粒转染技术改变细胞内NDR1与FBXO11的表达水平与蛋白活性;用改变NDR1或FBXO11表达水平的细胞进行细胞划