鼠尾藻多糖的提取、分离纯化、结构鉴定及生物活性研究

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鼠尾藻(Sargassum thunbergii)隶属于褐藻门,圆子纲,墨角藻目,马尾藻科,马尾藻属。国内外沿海分布相对广泛,资源非常丰富。鼠尾藻具有很高的应用价值,在食品、医药等领域应用广泛。鼠尾藻中含有蛋白质、纤维素、氨基酸以及矿物质等多种营养物质,而且还含有一定量的多糖、多酚、多不饱和脂肪酸等生物活性物质,这些活性物质赋予了鼠尾藻多种生物活性,如抗肿瘤活性、抗氧化活性、抗凝血活性以及降血糖、降血脂活性等。多糖物质近年来引起了国内外研究者的广泛关注,但是,目前为止,有关于鼠尾藻多糖的研究报道较少。本文对鼠尾藻多糖的提取工艺条件、分离纯化、理化性质、初步结构、抗氧化和免疫活性以及体外模拟消化情况进行了研究和分析。1鼠尾藻多糖的提取条件优化影响鼠尾藻多糖热水浸提的工艺条件主要有提取温度、提取时间、提取料液比以及提取次数。首先,选取这四个因素进行单因素实验,在单因素实验的基础上,设计L9(34)正交表,进行正交试验。根据正交试验结果,综合考虑成本以及人力等因素,选出最优提取工艺条件组合:提取温度为90℃,提取时间为4小时,提取料液比为30ml/g,提取次数为2次。此条件下的鼠尾藻粗多糖PST的得率为5.24%。2鼠尾藻多糖的分离纯化、理化性质以及初步结构鉴定PST经过DEAE-纤维素阴离子交换柱层析柱进行分离纯化得到三个组分PST-1,PST-2,PST-3。经过测定,结果表明,PST以及纯化组分PST-1、PST-2和PST-3的总糖含量分别为60.62%、73.16%、55.47%、40.92%。蛋白质含量分别为2.26%、1.06%、1.68%、0.96%。多酚含量分别为 1.53、0.86、0.45、0.23(mg GAE/100 mg)。糖醛酸含量分别为15.67%、9.83%、20.08、18.76。硫酸基含量分别为 10.06%、8.56%、20.89%、25.20%。采用高效液相色谱法对PST-1、PST-2、PST-3进行了分子量和纯度的测定。结果表明 PST-1、PST-2、PST-3 的分子量分别为 1372 KDa,1039 KDa,1127KDa。而且三个纯化组分的多糖成分比较均一。利用高效液相色谱法和红外光谱法对PST、PST-1、PST-2和PST-3进行了初步的结构分析。结果显示,PST以及PST-1、PST-2和PST-3的单糖组成相同,含量有所差别。鼠尾藻粗多糖中甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖以及岩藻糖的百分含量分别为 19.85%、4.01%、2.63%、2.16%、20.45%、8.53%、38.14%。PST-1甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖以及岩藻糖的百分含量分别为 25.27%、3.11%、1.71%、2.24%、17.19%、5.23%、42.06%。PST-2 中甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖以及岩藻糖的百分含量分别为20.11%、4.25%、7.33%、1.81%、14.50%、8.80%、38.03%。PST-3 中甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖以及岩藻糖的百分含量分别为22.32%、2.73%、4.73%、2.76%、16.49%、4.56%、42.56%。红外光谱检测结果显示,PST 以及 PST-1、PST-2和PST-3在4000 cm-1-500 cm-1范围内具有典型的多糖吸收峰。3鼠尾藻多糖的抗氧化活性和免疫活性采用化学方法研究了 PST及PST-1、PST-2、PST-3的抗氧化活性。研究表明PST及PST-1、PST-2、PST-3均具有一定的还原力,均能够有效的清除DPPH自由基,超氧阴离子自由基,ABTS自由基,而且具有一定的金属螯合能力。PST及其纯化组分PST-1,PST-2,PST-3对RAW264.7细胞具有一定的增殖作用,能够有效地增强RAW264.7细胞吞噬能力以及酸性磷酸酶的活性。4鼠尾藻多糖的体外模拟消化实验通过研究体外模拟唾液、胃液以及胃肠液消化PST的情况,结果表明PST经过唾液、胃液以及胃肠液消化后,其分子量并没有发生明显变化,还原糖含量也没有增多,而且没有游离单糖的生成,充分说明PST不能够被口腔,胃部以及小肠消化。
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