【摘 要】
：
犬瘟热（Canine Distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus,CDV）引起的一种急性、高度接触性传染病,主要感染食肉动物。CDV具备强大的跨越物种屏障传播的能力,现今已在7个目至少20个科的动物中发现了该病毒,其中包括非人灵长类动物。目前,接种疫苗是防控CDV感染犬的有效方法。然而,免疫失败的病例屡有报道。同时,CDV感染引起免疫抑制的机制尚不清楚。
【基金项目】
：
国家自然科学基金（31672563、31872454）； 国家重点研发计划项目（2016YFD0501004）； 广东省科技计划项目（2018B030311037,2018A030313633）；
论文部分内容阅读
犬瘟热（Canine Distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus,CDV）引起的一种急性、高度接触性传染病,主要感染食肉动物。CDV具备强大的跨越物种屏障传播的能力,现今已在7个目至少20个科的动物中发现了该病毒,其中包括非人灵长类动物。目前,接种疫苗是防控CDV感染犬的有效方法。然而,免疫失败的病例屡有报道。同时,CDV感染引起免疫抑制的机制尚不清楚。因此,本研究通过对广州地区CDV的病原学调查,结合公共数据库序列信息对CDV H基因开展了遗传进化分析,并分离得到5株CDV野毒株。然后,为了解CDV与先天免疫的互作关系,本研究初步探索了CDV调控IFN-β应答的作用。本研究主要开展了以下三个方面的工作。第一,从临床样本中检测到13株CDV野毒株,扩增其H基因,并进行遗传特征分析。H基因序列分析发现:13株CDV野毒株的H基因核苷酸与氨基酸序列的相似性分别为:98.4%～100.0%和99.1%～100.0%;与疫苗株Onderstepoort、Lederle和Convac相比,其序列相似性分别为90.1%～91.5%和89.3%～90.8%;进化树分析结果显示,13株CDV野毒株均属于AsiaⅠ型,与疫苗株的分支距离较远;研究表明疫苗株H蛋白存在4～7个潜在的天冬酰胺糖基化位点,而本研究鉴定的野毒株进化形成了9个潜在的天冬酰胺糖基化位点。由此可见,AsiaⅠ型CDV仍为广州市的流行基因型,与疫苗株相比存在一定的进化距离和明显差异。第二,利用Vero-SLAM细胞系从阳性样本中分离出5株CDV野毒株,从疫苗中分离出2株疫苗株,对分离株进行了病毒鉴定。毒株接种Vero-SLAM细胞后均能观察到典型合胞体病变、RT-PCR和IFA亦为阳性。五株野毒株GD188、GD189、GD1810、GD1811、GD1812和犬源疫苗株CDV-11、貂源疫苗株CDV3滴度分别为103.67/m L、102.75/m L、103.20/m L、103.13/m L、103.45/m L、106.00/m L、104.53/m L。根据CDV的N基因设计引物,建立CDV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,利用该方法测定病毒载量,依据其数据绘制生长曲线。从一步生长曲线看,野毒株和CDV-11趋势一致,由增速较缓渐变为指数增长,继而于48 h时间点达到峰值之后有所下降。CDV3前期趋势类似于其他两株,但于36 h先达到峰值进入平台期。第三,构建了犬IFN-βm RNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法和犬IFN-β启动子双荧光素酶报告体系。CDV野毒株GD1812、疫苗株和仙台病毒（Sendai Virus,Se V）（MOI=0.1）接种MDCK-SLAM细胞24 h后检测细胞中IFN-βm RNA表达水平。研究发现野毒株GD1812、CDV-11和CDV3在MDCK-SLAM细胞系中对其IFN-βm RNA表达无明显激活作用。IFN-β启动子双荧光素酶报告质粒转染入MDCK-SLAM和Vero-SLAM细胞,转染24h后将CDV野毒株GD1812、疫苗株和Se V（MOI=0.1）接种各细胞,感染24 h后检测各毒株对犬IFN-β启动子的激活情况。与IFN-βm RNA表达结果相应,CDV野毒株、犬源疫苗株CDV-11、貂源疫苗株CDV3在MDCK-SLAM和Vero-SLAM细胞中对IFN-β启动子亦无显著激活作用。该结果与报道的CDV患犬血液样本中未检测到IFN-β表达相符合,与同属的麻疹病毒（Measles Virus,Me V）对IFN-β应答的调控作用相似。目前CDV对IFN-β表达的作用机制尚不清楚,本研究为CDV逃逸宿主天然免疫反应机制增添了参考数据。
其他文献
猪流感（Swine influenza,SI）是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）引起的一种急性、高度传染性呼吸道疾病。根据其表面蛋白血凝素（Hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）的不同可将A型流感病毒划分为不同亚型。目前,我国猪群中流行的A型流感病毒以H1N1、H1N2和H3N2亚型为主。
新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染引起鸡和多种禽类一种急性、败血性和高度接触性的动物传染病,对家禽业造成了巨大经济损失。V蛋白是NDV复制过程中编码的一种重要的非结构蛋白,具有多种生物学功能。病毒蛋白的功能一方面与其结构紧密相关,另一方面与病毒蛋白在宿主的亚细胞定位也有密切关系。目前,国内外关于V蛋白亚细胞
中国是世界第一养鹅大国,广东又作为养鹅大省,然而,我国近些年不断出现鹅源的新发传染病,给我国养鹅业造成了巨大的经济损失。自2002年Breitbart首次对环境中病毒群落进行研究以来,病毒宏基因组学技术不断发展,大大拓展了人们对未知病毒的了解。因此,利用病毒宏基因组学对我国鹅携带的病毒群落进行调查,了解鹅携带的病毒种类,掌握病毒的变异和进化情况,有利于鹅类疾病的预警。本研究于2018年至2019年
鼠伤寒沙门菌是一种重要的人畜共患病原体,其对人、家畜和家禽以及其他动物均有致病性,造成很大的危害和经济损失。同时,由于抗菌药物在畜禽养殖和人临床中广泛使用,鼠伤寒沙门菌的耐药性已经十分严重。寻找与鼠伤寒沙门菌耐药性和致病性有关的靶标因子对防控该病具有重要的意义。转录因子BolA存在于大多数革兰氏阴性菌中,也是c-di-GMP系统中的重要受体分子,其具有多效性,在细菌生物被膜形成、外膜通透性、耐药性
谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum（C.glutamicum）是一种从土壤中分离得到的具有高GC含量的革兰氏阳性菌。它是工业生产氨基酸的重要菌株,已广泛应用于医药、食品及饲料等行业。谷氨酸棒状杆菌的全基因组测序已经完成,为该菌的改良提供了切实可靠的基础。国外已有研究证明,敲除部分前噬菌体基因和限制性酶修饰系统的棒状杆菌能有效地表达外源蛋白,但该菌种尚未商业化。本研究
牛结核病（Bovine Tuberculosis,b TB）是由结核分枝杆菌复合体成员牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种具有高度传染性的慢性人兽共患疾病。其特征是进行性消瘦、低度波动性发热、虚弱和食欲不振。核转录因子-κB（NF-κB）在调控机体免疫应答、炎症反应、细胞存活等方面发挥重要作用。已有研究证明,在结核分枝杆菌致病基因转录因子及其调控网络节点中,NF-κB参与
猪作为流感病毒的“遗传混合容器”,目前已从世界各地猪群中分离出多种亚型的人源和禽源流感病毒,包括H1、H2、H3、H4、H5、H7和H9等。不同基因型的流感病毒同时感染猪会导致基因重配进而促进病毒的进化,从而产生具有大流行潜力的重组毒株。为了调查猪群流感病毒的流行情况,本研究于2017年7月至2018年11月期间,对广东、福建、江西、湖南猪场猪群总共采集4920份血清,并进行血凝抑制试验（HI）,
猪乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）感染猪群的中枢神经系统性、急性传染病,能引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎。猪细小病毒病（Porcine parvovirus infection,PPI）是由猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）引起猪的繁殖障碍性传染病,造成怀孕母猪流
生命早期,子代的肠道免疫的建立依赖于肠道菌群的发育与成熟,而子代生命早期的肠道菌群来源于母代。因此,在哺乳期对母鼠的肠道菌群进行破坏,能够显著影响仔鼠肠道菌群的建立与成熟,并进而影响肠道免疫屏障的完整性及功能。而研究表明,参苓白术散能调节肠道菌群紊乱和肠道免疫。本试验首先通过哺乳期时给予母鼠抗生素处理,探究母鼠肠道菌群紊乱对仔鼠肠道免疫的影响;随后在断奶期间对仔鼠使用参苓白术散,探究参苓白术散对仔
黄体（Corpus luteum,CL）是哺乳动物卵巢中的暂时内分泌器官,是由大、小黄体细胞、内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞和免疫细胞等组成的异质腺,其主要功能是分泌孕酮（Progesterone,P4）。黄体结构和功能的规律性生成和退化对于准备、实现、维持妊娠以及维持正常生殖周期是必不可少的。灵长类动物的黄体生成和退化机制不明确,且与其他哺乳动物存在差别。食蟹猴的生殖周期与人类相似,研究其黄体