【摘 要】
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近年来,动物源性食品安全问题已经被世界卫生组织列为全球卫生领域重要的工作,成为全球关注热点,因此动物防疫和检疫工作在食品安全中的作用日益凸显。肉制品是否安全直接影响人类健康发展,因此解决食品安全问题需要对源头进行的严格控制和检测。非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起猪出现发热、出血、共济失调等系列综合症状,具有高致病性,急性死亡率高达100%的传染病,2018年8月我国首次发现该病毒
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近年来,动物源性食品安全问题已经被世界卫生组织列为全球卫生领域重要的工作,成为全球关注热点,因此动物防疫和检疫工作在食品安全中的作用日益凸显。肉制品是否安全直接影响人类健康发展,因此解决食品安全问题需要对源头进行的严格控制和检测。非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起猪出现发热、出血、共济失调等系列综合症状,具有高致病性,急性死亡率高达100%的传染病,2018年8月我国首次发现该病毒,给畜牧养殖业造成巨大损失,并威胁畜产品原料的食品安全。猪圆环病毒(PCV2)属于圆环病毒科的圆环病毒属,是一种小型无包膜病毒,具有圆形单链的最小动物DNA病毒,通常与猪伪狂犬病毒、猪细小病毒等其他病原混合感染导致严重的临床疾病,导致畜产品原料污染,从而威胁人类健康。猪伪狂犬病毒(PRV)是一种线性双股DNA病毒,是影响养猪业健康发展的重大传染病之一,可能对畜产品原料造成污染从而影响食品安全。论文建立了一种定量、特异性高、灵敏度好的芯片数字PCR方法,可以对三种单独或者混合型感染原料进行检测,为食品源头安全控制提供理论和技术支持。主要研究内容如下:(1)分别建立了单重qPCR和cdPCR检测ASFV的方法,其中cdPCR检测灵敏度为0.9 copies/μL,灵敏度是qPCR的15倍,同时,试验设计的ASFV的引物探针具有良好的特异性和重复性,可用于实际样品的检测,满足检测需求。(2)分别建立了单重qPCR和cdPCR检测PCV2的方法,其中cdPCR检测灵敏度为0.63 copies/μL,灵敏度是qPCR的12倍,同时,试验设计的PCV2引物探针具有良好的特异性和重复性,可用于实际样品的检测,满足检测需求。(3)分别建立了单重qPCR和cdPCR检测PRV的方法,其中cdPCR检测灵敏度为1.7 copies/μL,灵敏度是qPCR的10倍;同时,试验设计的PRV引物探针具有良好的特异性和重复性,可用于实际样品的检测,满足检测需求。(4)建立了多重qPCR和cdPCR可同时检测ASFV、PCV2、PRV的方法,cdPCR方法检测三种病原的灵敏度分别为1.0 copies/μL,1.2 copies/μL,1.94 copies/μL;其检测灵敏度是多重qPCR方法的30倍、35倍和20倍,三对引物都具有良好的特异性和重复性,为检测这三种病毒提供定量诊断方法和技术支持。
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