【摘 要】
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糖链是生物体内一类重要的生命物质,其多样的结构使得其在多种生命活动中起到丰富而重要的作用。了解糖链在生命活动中所发挥的作用,需要明确糖链结构与功能之间的构效关系。糖链的研究依赖于结构均一、明确的聚糖或糖缀合物。与蛋白质、核酸的生源合成途径不同,糖链的生源合成是一个非模板驱动的过程,这一过程是由一系列的酶通过逐个添加单糖的方式来合成复杂的糖链。适用于糖链高效合成的糖基转移酶是糖链酶促合成的关键工具,
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糖链是生物体内一类重要的生命物质,其多样的结构使得其在多种生命活动中起到丰富而重要的作用。了解糖链在生命活动中所发挥的作用,需要明确糖链结构与功能之间的构效关系。糖链的研究依赖于结构均一、明确的聚糖或糖缀合物。与蛋白质、核酸的生源合成途径不同,糖链的生源合成是一个非模板驱动的过程,这一过程是由一系列的酶通过逐个添加单糖的方式来合成复杂的糖链。适用于糖链高效合成的糖基转移酶是糖链酶促合成的关键工具,也是推动阐明聚糖多样性和功能的关键要素。唾液酸是哺乳动物中常见的单糖结构单元,常存在于糖链的非还原末端,在细胞识别、信号传导等生命过程中发挥重要作用。由于唾液酸结构的复杂性,唾液酸糖苷键的立体选择性合成一直以来都是糖合成化学领域的一个难题,而利用唾液酸转移酶可以高效、立体专一地合成相应的唾液酸苷键。Siaα2,6GalNAc糖苷键一种较为常见的唾液酸连接方式。目前,常用于合成Siaα2,6GalNAc糖苷键的α2,6-唾液酸转移酶是来源于海洋美人鱼发光杆菌的Pd2,6ST,因其宽泛的底物适应性,在合成过程中容易产生难以分离纯化的副产物,极大的限制了其在唾液酸化糖链酶促合成中的应用。为了解决这个问题,增加可用于合成Siaα2,6GalNAc糖苷键的糖基转移酶的种类,本研究采用Sf9昆虫细胞表达系统对人源的唾液酸转移酶ST6GALNAC5和ST6GALNAC6进行了体外重组表达,获得了可应用于合成的唾液酸转移酶。我们对这两个酶的pH、温度和金属离子等酶学性质进行考察,找到了最适的酶促反应条件。利用酶法模块策略合成了一系列底物,通过体外实验探究其底物适应性,进一步验证其识别的结构特征;将其成功应用于双唾液酸化T抗原、神经节苷脂GD1α、GM1α和GalNAc-GD1α等复杂唾液酸化糖链的合成。为目前难以合成的Neu5Acα2,6GalNAc糖苷键的构建提供了新的解决途径。
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