【摘 要】
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本文主要对来源不同环境的土壤微生物(包括盐湖土壤,沙漠和红色土壤)及植物内源菌的次生代谢产物进行了研究。收集样品后,首先对真菌和细菌进行纯化,并对纯化后的菌株进行小规模培养。从土壤样品中总共分离出27种细菌,从两种药用植物及其周围土壤中分离出36种细菌和38种真菌。在这些菌株中,真菌PS(S)-F01分离于假蒟植物Piper sarmentosum Roxb.的茎部,目前尚未有对其代谢产物的报道,
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本文主要对来源不同环境的土壤微生物(包括盐湖土壤,沙漠和红色土壤)及植物内源菌的次生代谢产物进行了研究。收集样品后,首先对真菌和细菌进行纯化,并对纯化后的菌株进行小规模培养。从土壤样品中总共分离出27种细菌,从两种药用植物及其周围土壤中分离出36种细菌和38种真菌。在这些菌株中,真菌PS(S)-F01分离于假蒟植物Piper sarmentosum Roxb.的茎部,目前尚未有对其代谢产物的报道,因此该菌株被选中进行进一步研究。通过28S r DNA和ITS序列测序,与NCBI数据库进行比对,从而将该菌株鉴定为Colletotrichum brevisporum。对该菌株进行培养条件优化后,在马铃薯葡萄糖肉汤PDB,30℃的摇床中,以p H 7.0进行大规模培养。通过溶剂萃取、硅胶柱色谱分离及半制备高效液相色谱,对提取物进行进一步的分离和纯化,从中获得了九种化合物,包括七个未被描述的联蒽酮以及两个已知的蒽醌类化合物:brevianthrones A1-A3(1-3),brevianthrone B1-B4(4-7),nalgiovensin(8)和1-methoxy-nalgiovensin(9)。通过结合HRMS,NMR,ECD模拟和X射线晶体学对其进行结构解析。在这些化合物中,Brevianthrone A2/A3(2/3)和Brevianthrone B2/B3(5/6)以混合物形式获得。对所有化合物进行抗菌活性测试,结果均无明显活性。将化合物Brevianthrone A1(1),nalgiovensin(8)和1-methoxy nalgiovensin(9)对人乳腺癌(MDA-MB-231)和人肝癌(Hep G-2)细胞系进行细胞毒性测试,结果均无明显活性。利用LC-MS/MS对C.brevisporum PS(S)-F01的次级代谢产物进行分子网络分析,从而定位已分离的化合物,并推测该菌株产生的相关代谢物的结构。从植物提取物中分离出的内生细菌PS-B通过16S r RNA测序鉴定为Bacillus subtilis。将其与C.brevisporum PS(S)-F01共培养,并通过HPLC和LC-MS/MS分析次生代谢产物的差异。构建了分子网络以可视化单培养和共培养之间的变化,突出显示仅在共培养中产生的峰,这些峰可能是将来分离的有希望的目标。
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